【摘 要】
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目的 克隆、表达和纯化结核分枝杆菌脯氨酸-脯氨酸-谷氨酸15(PPE15)蛋白,制备并鉴定PPE15蛋白兔多克隆抗体.方法 通过PCR从结核分枝杆菌H37Rv株基因组扩增PPE15基因,利用同源重组克隆技术构建原核表达组氨酸标签PPE15蛋白的pET28a-PPE15载体.将pET28a-PPE15转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导PPE15蛋白表达,通过SDS-PAGE鉴定PPE15蛋白表达.用亲和层析法Ni-NTA柱纯化PPE15蛋白,用复性纯化后的P
【机 构】
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蚌埠医学院检验医学院临床检验诊断学教研室,安徽蚌埠233030;蚌埠医学院免疫学教研室,慢性疾病免疫学基础与临床安徽省重点实验室,安徽蚌埠233030;蚌埠医学院免疫学教研室,慢性疾病免疫学基础与临床
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目的 克隆、表达和纯化结核分枝杆菌脯氨酸-脯氨酸-谷氨酸15(PPE15)蛋白,制备并鉴定PPE15蛋白兔多克隆抗体.方法 通过PCR从结核分枝杆菌H37Rv株基因组扩增PPE15基因,利用同源重组克隆技术构建原核表达组氨酸标签PPE15蛋白的pET28a-PPE15载体.将pET28a-PPE15转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导PPE15蛋白表达,通过SDS-PAGE鉴定PPE15蛋白表达.用亲和层析法Ni-NTA柱纯化PPE15蛋白,用复性纯化后的PPE15蛋白免疫新西兰大白兔,制备和纯化多克隆抗体.Western blot法鉴定PPE15蛋白与人血清和多克隆抗体结合特异性,间接ELISA检测多克隆抗体效价.结果 成功构建pET28a-PPE15重组表达载体,PPE15蛋白主要以包涵体形式存在,纯化后在相对分子质量(Mr)38 000位置处有单一条带.纯化后PPE15蛋白与结核病患者和多克隆抗体发生特异性反应,多克隆抗体效价达1:1 300 480以上.结论 成功表达和纯化重组PPE15蛋白,并制备出高效价兔源性多克隆抗体,为进一步研究PPE15蛋白的功能提供了实验基础.
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造血干细胞(hematopoietic stem cell,HSC)向红细胞(red blood cell,RBC)的分化是一个精确又复杂的过程,从谱系决定到终末分化以及去核、去细胞器的过程都受到了严格的调控.红细胞生成障碍会导致各种疾病,治疗这些疾病的关键是阐明红系发育中的调控机制.该综述主要总结了近年来在分子水平上的调控因素研究,包括对转录和转录后以及翻译和翻译后的调节,以求完善红系分化调控网络,对了解红细胞发育异常疾病的发病机制以及寻求新的治疗手段有重要意义.
新工科创新型人才培养是目前各类技工院校、高职院校专业向应用型转型,深入服务地方经济社会发展,实现校企深度融合的一项系统性的改革举措.这些举措包括:跨校组建师资团队、成立职业教育“学分银行”、引导技能创业实现优质就业等新观念与新方法.本文结合2021年人社部《关于扩大院校毕业年度毕业生参加职业技能培训有关政策范围的通知》等文件精神,提出“学业—专业—职业—创业—事业”的链式人才培养模式,重点研讨“校、校、企”混合制组建高等职业教育联盟的新思路,以及“学业扎实、专业精湛、职业提升、创业卓越、事业终享”的复合创
目的 探讨肉桂酰雷公藤内酯醇(T32)对γ干扰素诱导蛋白10(IP-10)在SV40MES13小鼠肾小球系膜细胞表达及促增殖作用的影响.方法 采用(2～30)ng/mL T32和(1～500)ng/mL IP-10与SV40MES13细胞共培养24 h,利用CCK-8法检测细胞生存率确定T32和IP-10最佳处理剂量;将对数生长期的SV40MES13细胞随机分为空白组、1000 U/mL γ干扰素(IFN-γ)刺激组、IFN-γ联合10 μmol/L吡咯烷二硫氨基甲酸(PDTC)干预组和IFN-γ联合(2
自然界中的植物为保护自身免受病原菌侵害,进化出了复杂的防御系统,其中,植物过敏性反应通过侵染部位细胞的快速死亡,限制病原菌的进一步扩散.植物过敏性诱导反应蛋白与植物过敏性反应密切相关,在植物免疫过程中发挥重要作用.植物过敏性诱导反应蛋白家族成员含有高度保守的SPFH结构域,该结构域蛋白的重要功能之一是参与膜筏微区的形成.近年来,研究表明植物过敏性诱导反应蛋白除参与植物抗病反应、组织膜筏微区形成外,在花青素生物合成、离子转运以及非生物胁迫过程中也发挥重要功能.该文综述了植物过敏性诱导反应蛋白的研究历史、结构
实现中华民族伟大复兴,是中华民族近代以来最伟大的梦想,更是中国共产党百年来矢志不渝的奋斗主题.一百年来,为担负起实现中华民族伟大复兴的历史重任,党一以贯之地推进自身建设,以伟大自我革命推动伟大社会革命,带领中华民族迎来了从站起来、富起来到强起来的伟大飞跃,实现中华民族伟大复兴进入了不可逆转的历史进程.这一伟大成就,证明党围绕实现中华民族伟大复兴而进行的党的自身建设理论和实践的巨大成功,也证明了推进党的自身建设首先要在理论上弄明白党的自身建设的目的是什么,以及为达到这一目的需要建设一个什么样的党和如何建成这
中国共产党在领导我国社会主义事业发展的进程中对社会主义社会矛盾学说进行了不断的探索和发展.毛泽东创立了比较系统的社会主义社会矛盾学说,邓小平、江泽民、胡锦涛对社会主义社会矛盾学说进一步发展,习近平对新时代社会主义社会矛盾学说进行了新论述.社会主义社会矛盾学说是一个随着实践发展不断与时俱进的探索发展过程,这为我们今天正确认识和处理我国社会主义社会矛盾问题提供了科学的理论指导.
目的 探讨T细胞因子3(TCF3)在肝细胞肝癌组织中的表达情况及其与肝癌患者预后的相关性,探索TCF3对肝癌细胞侵袭、迁移和转移能力的影响.方法 利用肿瘤公共数据库和免疫组织化学染色方法,检测TCF3在肝癌组织的mRNA和蛋白表达,同时分析TCF3表达与肝癌患者预后的关系.Western blot法检测不同人肝癌细胞系中的TCF3的表达情况,并通过慢病毒感染技术分别构建TCF3上调、下调稳转细胞系,采用TranswellTM实验检测TCF3对肝癌细胞体外侵袭迁移能力的影响,采用裸鼠肝脏原位移植瘤转移实验探
提高青少年法治素养,是全面依法治国的基石,需要专门的法治教育人才队伍予以支撑.对1835名中小学法治教师的教育背景、工作任务、个人发展情况等进行调查分析,结果显示其普遍面临未接受过法学专业学历教育、法治素养不足,需进行多学科教学或兼任教职以外其他职务、工作任务繁重,集体归属感弱,参与在职培训机会少,个人发展空间不足等问题,影响了青少年法治教育效果的进一步提升.因此建议通过学历培养、在职培训体系的构建与外部发展环境的优化,逐步形成完备的中小学法治师资培育机制.
网络空间战略博弈是当前中美战略竞争激化的一个缩影,具有长期性、战略性与复合性.当前中美网络空间战略博弈最突出地体现在国防、5G与AI三个领域,其本质是美国极力维护网络霸权与中国反对网络霸权和争取科技自主之间的冲突.造成当前中美网络空间战略博弈激化的具体动因包括权力转移、国家利益及意识形态等因素.未来较长一段时间内,“遏制”仍将是美国对华网络空间战略的核心,借助网络舆论优势在意识形态领域持续施压中国是其主要手段,美国针对中国的“地缘政治”打压与数字“一带一路”对冲将会更加激烈.对此,中国应该保持充分的战略定