论文部分内容阅读
目的
建立Hsf4-/-小鼠的晶状体永生化上皮细胞系。
方法实验研究。取新生P6天的Hsf4-/-小鼠晶状体原代培养晶状体上皮细胞 (MLEC),用SV40,T-抗原转染,G418筛选建立永生化细胞系MLEC/Hsf4-/-,免疫印迹法检测α-A晶状体蛋白表达。
结果倒置相差显微镜下观察可见细胞贴壁生长,有伪足伸出,多角形,大小均匀,细胞膜边界清晰,细胞质透亮。消化后的细胞呈圆形透亮,胞质丰富。免疫印迹法检测MLEC/Hsf4-/-细胞 (两个克隆) 中的α-A晶状体蛋白 (α-Acrystallin) 有表达。转染Hsf4b蛋白后Hsp25蛋白表达上调。
结论采用组织块接种法获得小鼠晶状体上皮细胞后,转染SV40大T-抗原,G418筛选可成功建立永生化细胞系MLEC/Hsf4-/-。(中华眼科杂志,2013,49:1029-1031)