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探讨钙调素依赖蛋白激酶家族Ⅱ(Calmodulin-dependent kinases casades,CaMKⅡ)表达调控对大鼠肝细胞BRL-3A凋亡的影响。
方法通过培养稳定传代的大鼠肝细胞BRL-3A细胞,并建立构建CaMKⅡγ蛋白(LV-CaMKⅡγ组)和CaMKⅡγshRNA(shRNA组)的慢病毒表达体系,同时予以灌注相应的空白载体(LV-NC组、shRNA-NC组)及空白对照(CON组)形成对照,通过Western blot法检测各组CaMKⅡ、细胞色素C(Cytochrome C,Cyt C)、凋亡诱导因子(Apoptosis inducing factor,AIF)蛋白的表达,并通过Tunel法检测大鼠肝细胞BRL-3A凋亡率。
结果LV-CaMKⅡγ组的CaMKⅡ、Cyt C、AIF的蛋白表达量较CON组显著增多(均P<0.05);shRNA组的CaMKⅡ、Cyt C、AIF的蛋白表达量较CON组显著降低(均P<0.05);而CON组、LV-NC组、shRNA-NC组组间比较无显著差异(P>0.05)。同一时点LV-CaMKⅡγ组肝细胞凋亡比CON组多,差异有统计学意义(P<0.05);同一时点shRNA组肝细胞凋亡比CON组少、差异有统计学意义(P<0.05);shRNA-NC组、LV-NC组和CON组有差异但无统计学意义(P>0.05)。
结论特异性阻断CaMKⅡ信号通路可抑制肝细胞BRL-3A凋亡;而增强的CaMKⅡ信号通路则促进肝细胞BRL-3A凋亡。