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细胞因子是调节机体细胞免疫的重要物质。已有实验表明，γ-干扰素可明显提高机体抗肿瘤、抗感染的能力。随着分子生物学及分子遗传学等基础学科的发展，疾病的基因治疗已成为当今研究的热点。构建可供基因转染的真核细胞表达载体，是进行基因转染研究的基础，具有重要的实用价值。本文旨在构建可供调节机体细胞免疫的重组大鼠γ-干扰素真核表达载体，以供基因治疗研究之用。rn 本研究首先采用RT-PCR的方法获得Wistar大鼠肺部γ-干扰素的目的基因，并进行纯化。引物序列为：Forward 5＇CGGAATTCATCCATGAGTGCTACACGC 3＇：Reverse 5＇TAG-GATCCCTCTCTACCCCAGAATCAG 3＇。反应条件：95℃ 3min，冰浴。94℃45 s，57℃ 50 s，72℃ 90 s，35循环，72℃ 10min。然后通过双酶切、双粘末端定向克隆的方法构建Wist-ar大鼠重组γ-干扰素真核表达载体。进而采用电穿孔转化方法将重组pLXSN-IFN真核表达载体导人大肠杆菌，转化条件为1．25 kv，25 pF，200 Ω。经含0．5 mg/ml氨苄青霉素LB培养基扩增后，小量提取质粒，并进行电泳和测序鉴定。rn 质粒小量提取、双酶切后电泳结果可见，重组pLX-SN-IFN双酶切后载体条带，以及释放出的目的基因片段条带。