【摘 要】
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目的研究小干扰RNA(siRNA)沉默人乳头瘤病毒（HPV）16E6基因对子宫颈癌SiHa细胞系中E-钙黏蛋白（E-cad）表达及其基因启动子区高甲基化的影响。方法运用以慢病毒为载体质粒的siRNA沉默子宫颈癌SiHa细胞系中HPV16E6基因。采用实时荧光定量聚合酶链反应（RT-qPCR）法及蛋白质印迹法（Western blot）分别检测沉默后SiHa细胞中HPV16E6 mRNA表达水平、E
【机 构】
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目的研究小干扰RNA(siRNA)沉默人乳头瘤病毒（HPV）16E6基因对子宫颈癌SiHa细胞系中E-钙黏蛋白（E-cad）表达及其基因启动子区高甲基化的影响。
方法运用以慢病毒为载体质粒的siRNA沉默子宫颈癌SiHa细胞系中HPV16E6基因。采用实时荧光定量聚合酶链反应（RT-qPCR）法及蛋白质印迹法（Western blot）分别检测沉默后SiHa细胞中HPV16E6 mRNA表达水平、E-cad mRNA及蛋白表达水平。用甲基化特异性PCR(MSP)法检测SiHa细胞系中E-cad基因（CDH1）启动子区甲基化情况。
结果siRNA E6组、空载体组、空白对照组E-cad mRNA相对表达量分别为4.755± 1.085、1.224±0.840、1.327±1.221，蛋白相对表达量分别为0.616±0.019、0.325±0.016、0.299±0.015，其中siRNA E6组SiHa细胞中E-cad mRNA及蛋白相对表达量明显高于另两组，差异均有统计学意义（F= 21.346, P<0.01；F=323.398，P<0.01），而空载体组和空白对照组之间差异无统计学意义（P>0.05）。与HPV16E6基因沉默前E-cad完全甲基化状态相比较，沉默后E-cad基因甲基化扩增产物呈弱阳性，其强度较空载体组及空白对照组明显减弱，而非甲基化扩增呈阳性。
结论HPV16E6基因沉默可使子宫颈癌SiHa细胞中E-cad表达上调，同时能够降低CDH1基因启动子区高甲基化水平，可能在一定程度上扭转CDH1基因启动子区的高甲基化状态，引起E-cad重新表达。
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