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构建重组人淋巴毒素(rhLT)随机点突变组合文库以进行体外分子进化及结构和功能的研究。应用含随机核苷酸序列的引物，通过Overlap PCR的方法分别对rhLT的46、106和130位氨基酸进行定点随机突变，获得各单点随机突变体库。通过基因操作将这三个单点随机突变体库拼接并克隆于pMD-18T载体建立三点组合突变体文库，DNA测序鉴定突变位点的随机性和多样性，原核表达该变异体库，体外测定生物学活性。成功获得rhLT三点随机点突变组合文库，其转化克隆数达到1．5×10^5，是多样性理论值的4．5倍