【摘 要】
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根据OC-1△D86基因序列.设计合成了7条寡核苷酸片段.通过重叠延伸PCR技术合成了OC-I△D86基因,利用设计好的BamH1/Xho I酶切位点将OC-I△D86基因克隆到原核表达载体pet21b中,
【机 构】
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山东省农业科学院蔬菜研究所,济南,250100济南北方农艺科学研究所,济南,250100;
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根据OC-1△D86基因序列.设计合成了7条寡核苷酸片段.通过重叠延伸PCR技术合成了OC-I△D86基因,利用设计好的BamH1/Xho I酶切位点将OC-I△D86基因克隆到原核表达载体pet21b中,在1 mmol/L的IPTG诱导后5 h,OC-I△D86融合基因在大肠杆菌中得到表达,表达产物处于可溶状态,其表达量占总蛋白的11.4%,可溶性蛋白的16.4%:利用Ni-NTA系统纯化该蛋白并经PEG20000浓缩后.活性分析表明该蛋白酶抑制剂在体外表现出对木瓜蛋白酶明显的抑制作用,这为转OC-I△lD86基因的抗根结线虫植物基因工程抗体制备,以及进一步体内的抗根结线虫研究奠定了基础.
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