【摘 要】
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目的 探讨HBx(hepatitis B virus X protein)及HBs(hepatitis B virus S protein)对RhoC启动子的作用机制,分析可能相互作用的启动子调控元件.方法构建RhoC启动子截短突变克
【机 构】
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重庆医科大学感染性疾病分子生物学教育部重点实验室
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目的 探讨HBx(hepatitis B virus X protein)及HBs(hepatitis B virus S protein)对RhoC启动子的作用机制,分析可能相互作用的启动子调控元件.方法构建RhoC启动子截短突变克隆,双荧光素酶报告分析系统(the dual-luciferase reporter assay system)检测RhoC启动子相对荧光素酶活性,通过分析启动子相对活性变化进而筛寻到起调控作用的启动子区段.过表达Ets-1转录因子,检测RhoC启动子相对荧光素酶活性.结果①成功构建了5个RhoC启动子截短变异克隆.② 分别在HepG2细胞和HepG2.2.15细胞中验证了RhoC截短变异启动子活性,确定了起关键作用的启动子区段(-491 bp～-320 bp、-124 bp～-58 bp).③ HepG2细胞中分别过表达HBx及HBs,发现启动子区段-491 bp～-320 bp及-187 bp～-124 bp可以被HBx及HBs调控.④文献检索结合软件分析这些启动子区段序列,找到了高度相关的转录因子Ets-1、NF-κΒ、Sp1等.⑤ 荧光素酶检测和Real-time PCR初步验证了转录因子Ets-1对RhoC的调控作用.结论 HBx及HBs可能通过Ets-1等转录因子调控RhoC启动子进而上调RhoC启动子活性.
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