【摘 要】
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目的 探讨微小RNA-1246(miR-1246)在妊娠期糖尿病(GDM)患者胎盘组织中的表达及其对滋养细胞生物学行为的影响与作用机制.方法 收集慈溪市人民医院2017年8月-2019年6月收治的50例GDM患者和50例正常孕妇胎盘组织,采用荧光定量PCR分析胎盘组织中miR-1246与胎盘特异性基因1(PLAC1)mRNA的表达情况,采用免疫组织化学染色法检测PLAC1蛋白表达.脂质体技术体外转染miR-1246模拟物、抑制物及阴性对照(NC)至人滋养层细胞系HTR-8/SVneo,通过CCK-8法、细
【机 构】
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慈溪市人民医院妇产科,浙江慈溪315300
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目的 探讨微小RNA-1246(miR-1246)在妊娠期糖尿病(GDM)患者胎盘组织中的表达及其对滋养细胞生物学行为的影响与作用机制.方法 收集慈溪市人民医院2017年8月-2019年6月收治的50例GDM患者和50例正常孕妇胎盘组织,采用荧光定量PCR分析胎盘组织中miR-1246与胎盘特异性基因1(PLAC1)mRNA的表达情况,采用免疫组织化学染色法检测PLAC1蛋白表达.脂质体技术体外转染miR-1246模拟物、抑制物及阴性对照(NC)至人滋养层细胞系HTR-8/SVneo,通过CCK-8法、细胞划痕实验、Transwell小室实验及Annexin V-FITC/PI实验分别观察其对细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡的影响.采用生物信息学、双荧光素酶报告基因实验及蛋白质印迹分析miR-1246与PLAC1的靶向关系.结果 miR-1246在GDM患者胎盘组织中表达量显著高于健康胎盘组织(P＜0.01),而PLAC1 mRNA与蛋白在GDM胎盘组织中表达水平显著低于健康胎盘组织中的表达水平(P＜0.01).体外转染miR-1246模拟物过表达miR-1246后,可明显抑制HTR-8/SVneo细胞的增殖、侵袭及迁移并促进细胞凋亡(P＜O.01).而体外转染miR-1246抑制物抑制miR-1246后,可明显促进HTR-8/SVneo细胞的增殖、侵袭及迁移并抑制细胞凋亡(P＜0.01).PLAC1的3\'-非编码区(3\'-UTR)存在于miR-1246结合序列,miR-1246能够明显降低PLAC1-WT荧光素酶的活性(P＜0.05).转染miR-1246模拟物可显著降低PLAC1的蛋白表达水平,而转染miR-1246抑制物结果与此相反(P＜0.05).结论 miR-1246在GDM患者胎盘组织中呈现高表达,抑制miR-1246可显著促进胎盘细胞的增殖、迁移及侵袭并抑制其凋亡,miR-1246可能通过负调控PLAC1参与GDM的病理机制.
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