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【摘 要】 目的：建立维生素B6凝胶剂中维生素B6的含量测定方法。方法：采用卡波姆940为基质，以维生素B6为主药，制备成维生素B6凝胶剂，采用紫外分光光度法测定维生素B6的含量。结果：卡波姆为基质制备的凝胶剂质地均匀细腻、质量稳定；采用紫外分光光度法，以291nm作为维生素B6检测波长，含量测定方法可行，维生素B6在5～25μg/ml浓度范围内，线性关系良好，平均回收率为98.79%，RSD为0.46%。结论：采用紫外分光光度法测定维生素B6凝胶剂中维生素B6含量方法简单可行，结果准确。
【关键词】 维生素B6凝胶剂；紫外分光光度法；含量测定
【中图分类号】R927.2 【文献标志码】 A 【文章编号】1007-8517（2015）09-0022-02
Abstract：Objective To establish the method for the content determination of vitamin B6 gels.Method Using the matrix of Carbopol 940 and vitamin B6-based medicine to prepare vitamin B6 gels，and using the UV to evaluate content determination of vitamin B6.Results Using carbopol gels as matrix to prepare the gels which is uniform，exquisite and stable quality.Using the UV spectrophotometry to 291nm as wavelength to detect the content determination of vitamin B6，which is feasible and the calibration curve are linear within a well range of vitamin B6 in 5-25μg/ml，the average recovery is 98.79%，RSD is 0.46%.Conclusion Using the UV spectrophotometry to detect the ointmen of vitamin B6，which is simple，feasible and accurate.
Keywords：Vitamin B6 gels；UV spectrophotometry；Content determination
維生素B6（Vitamin B6）又称吡哆素、盐酸吡哆辛，化学名为2-甲基-3-羟基-4，5-二羟甲基吡啶盐酸盐，本品固体在空气中稳定，但受热可升华，是一种水溶性维生素，体内主要与蛋白质结合存在，包括吡哆醇、吡哆醛、吡哆胺三种形式[1]。近年来，维生素B6被广泛应用于皮肤科疾病，在体内参与蛋白质的合成、脂质的代谢[2]，用于治疗冻疮、皮肤红肿、干燥皱裂、脂溢性皮炎、舌炎等疾病。维生素B6软膏剂已在临床上使用，本文将维生素B6制备成以卡波姆为基质的凝胶剂，将解决其乳膏剂存在质地不均匀、吸收减慢、涂布不均、污染衣物等问题，并研究维生素B6凝胶剂中维生素B6含量测定方法，为进一步工业化生产凝胶剂的质量控制提供依据。
1 仪器与试药
1.1 仪器 UV-2401PC紫外分光光度计（日本岛津）。
1.2 材料 维生素B6对照品（批号：100116-201103，中国药品生物制品检定所）；卡波姆940（药用级，批号：20140711，广州市汉普医药有限公司）；丙二醇、乙醇、盐酸为分析纯，其余原料均为药用规格。
2 处方与制备
2.1 处方 维生素B6 12g，卡波姆940 10g，丙二醇120g，甘油100g，羟苯乙酯12g，三乙醇胺12g，加纯化水至1000g。
2.2 制备 称取处方量的卡波姆于水中静置，溶胀过夜，加入丙二醇与甘油，滴加三乙醇胺，不断地搅拌成凝胶基质；将维生素B6溶于水中；将羟苯乙酯溶于乙醇，缓缓加入上述凝胶基质中，加水至足量，搅匀，即得透明均一的维生素B6凝胶剂。
3 含量测定
3.1 空白基质对照溶液的制备 按处方比例，配制空白基质，称取0.1g，加0.1mol/L的盐酸溶液适量至100ml的容量瓶中，振摇，并稀释至刻度，过滤后，取滤液作为空白基质对照溶液。
3.2 维生素B6对照品溶液的制备 取维生素B6对照品适量，用0.1mol/L的盐酸溶液溶解并配制成每1ml溶液中含10μg的维生素B6溶液，作为对照品溶液。
3.3 样品溶液的制备 称取样品0.1g加0.1mol/L的盐酸溶液适量至100ml的容量瓶中，振摇，并稀释至刻度，摇匀，过滤后，取滤液作为样品溶液。
3.4 波长的选择 分别取上述三种溶液，于200～400nm波长范围内扫描，结果见图1。结果发现对照品和样品溶液在291nm波长处有最大吸收，空白基质对照液在此波长处无吸收，由此可以采用0.1mol/L盐酸溶液作空白，在291nm处测定维生素B6的含量，其空白基质无干扰吸收。
3.5 标准曲线的绘制 精密称取维生素B6对照品25mg，置于100ml的容量瓶中，加0.1mol/L的盐酸溶液适量溶解稀释至刻度，作为对照品贮备液，分别取1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml的对照品贮备液于50ml容量瓶中，加0.1mol/L的盐酸溶液适量溶解稀释至刻度，摇匀。以空白基质的0.1mol/L盐酸溶液作空白，在291nm波长处测定吸光度，结果表明在5～25μg/ml范围内，吸光度（A）与浓度（C）呈良好的线性关系，回归方程为：A=0.025C+0.07，r=0.9990（n=5），表明该方法符合含量方法学验证的要求。 3.6 精密度试验 取“3.2”项下的维生素B6对照品溶液，照紫外分光光度法连续测6次，以吸光度计算，维生素B6吸光度的RSD为0.50%。结果表明该方法重复性较好。
3.7 回收率试验 为了考察该含量测定方法的准确度，进行了回收率试验，按处方量的80%、100%、120%，精密称取维生素B6对照品，分别加入空白基质按照样品的制备方法制成供试品，按“3.3”项下样品的制备方法，同法测定，计算回收率，结果回收率良好（见表1）。表明采用該方法测定维生素B6的含量准确度高，含量可控。
3.8 样品含量测定 取自制样品3批（20140901、20140902、20140903），按“3.3”项下样品的制备方法，同法测定，含量分别为98.32%、98.41%、98.37%。
3.9 样品的稳定性试验
3.9.1 离心试验 取制备好的3批样品10g，分别装入离心管中，以3000rpm离心，结果该凝胶剂无分层现象，稳定性较好。
3.9.2 加速试验[3] 将样品置于将样品置于40℃，75%RH的药品稳定性试验箱中，放置6个月，采用紫外分光光度法测定其三批样品含量，含量未发生变化，性状透明均匀，未发生分层现象。
3.9.3 长期试验[3] 将样品置于25℃，60%RH的药品稳定性试验箱中，放置6个月，其含量、性状也未发生变化。表明该凝胶剂在6个月内稳定。
4 讨论
凝胶剂作为新型的外用制剂，具有良好的生物相容性、易于涂布/局部给药后易于吸收、不污染衣物、稳定性好的特定[4]。卡波姆是丙烯酸与烷基蔗糖交联而成的丙烯酸聚合物，是一种广泛应用的高分子基质材料。卡波姆含有大量的羧基，可被碱性物质中和，当羧基游离时，由于负电荷相互排斥作用，使分子链呈现弥散伸展的状态，随后呈极大的膨胀状态，具有强大的粘性和良好的载药功能，同时具有良好的增稠性、成膜性[5]。研究表明，当羧基游离时，凝胶剂才具有较强的黏附能力[6]。本文采用水溶性的卡波姆作为基质，制成维生素B6凝胶剂后并采用了紫外分光光度法测定其含量，由于空白基质溶液在291nm处出无吸收，排除了干扰，使含量测定具有专属性，同时进行含量方法学验证，表明该方法重复性好，准确度高。在处理样品时，由于卡波姆为高分子材料，溶液出现浑浊现象，最后采用0.1mol/L的盐酸溶液作为溶剂，溶液较为澄清，利于紫外法的测定，从而排除了干扰。通过以上试验，表明采用紫外分光光度法测定该凝胶剂中维生素B6的含量，简单可行，质量可控，结果准确，可为工业化生产凝胶剂的质量控制提供依据。
参考文献
[1]徐勇智，范卫东，党登峰，等.维生素B6的合成研究进展[J].广东化工，2012，40（12）：50.
[2]Ahmad I，Qadeer K Nazim U.Vitamin B6：deficiency diseases and methods of analysis[J].Pakistan Journal of Pharmaceutical Sciences，2013，26 （5）：1057-1069.
[3]国家药典委员会.中国药典（二部）[S].北京：化学工业出版社，2005：附录178-179.
[4]王敏，薛晓东.卡波姆凝胶剂的临床应用研究进展[J].医学综述，2013，19（6）：1078-1079.
[5]梁斌，朱丹燕.新型凝胶剂研究进展[J].海峡药学，2012，24（3）：13-15.
[6]Al-Malah，Kamal I Azzam，Mohammed O J.Carbomer Dispersions：A New Calibration Method for Quantifying Shear-Thinning and Shear-Thickening Effects[J].Journal of Dispersion Science & Technology，2012，33（9）：1274-1283.
（收稿日期：2015.02.12）
【关键词】 维生素B6凝胶剂；紫外分光光度法；含量测定
【中图分类号】R927.2 【文献标志码】 A 【文章编号】1007-8517（2015）09-0022-02
Abstract：Objective To establish the method for the content determination of vitamin B6 gels.Method Using the matrix of Carbopol 940 and vitamin B6-based medicine to prepare vitamin B6 gels，and using the UV to evaluate content determination of vitamin B6.Results Using carbopol gels as matrix to prepare the gels which is uniform，exquisite and stable quality.Using the UV spectrophotometry to 291nm as wavelength to detect the content determination of vitamin B6，which is feasible and the calibration curve are linear within a well range of vitamin B6 in 5-25μg/ml，the average recovery is 98.79%，RSD is 0.46%.Conclusion Using the UV spectrophotometry to detect the ointmen of vitamin B6，which is simple，feasible and accurate.
Keywords：Vitamin B6 gels；UV spectrophotometry；Content determination
維生素B6（Vitamin B6）又称吡哆素、盐酸吡哆辛，化学名为2-甲基-3-羟基-4，5-二羟甲基吡啶盐酸盐，本品固体在空气中稳定，但受热可升华，是一种水溶性维生素，体内主要与蛋白质结合存在，包括吡哆醇、吡哆醛、吡哆胺三种形式[1]。近年来，维生素B6被广泛应用于皮肤科疾病，在体内参与蛋白质的合成、脂质的代谢[2]，用于治疗冻疮、皮肤红肿、干燥皱裂、脂溢性皮炎、舌炎等疾病。维生素B6软膏剂已在临床上使用，本文将维生素B6制备成以卡波姆为基质的凝胶剂，将解决其乳膏剂存在质地不均匀、吸收减慢、涂布不均、污染衣物等问题，并研究维生素B6凝胶剂中维生素B6含量测定方法，为进一步工业化生产凝胶剂的质量控制提供依据。
1 仪器与试药
1.1 仪器 UV-2401PC紫外分光光度计（日本岛津）。
1.2 材料 维生素B6对照品（批号：100116-201103，中国药品生物制品检定所）；卡波姆940（药用级，批号：20140711，广州市汉普医药有限公司）；丙二醇、乙醇、盐酸为分析纯，其余原料均为药用规格。
2 处方与制备
2.1 处方 维生素B6 12g，卡波姆940 10g，丙二醇120g，甘油100g，羟苯乙酯12g，三乙醇胺12g，加纯化水至1000g。
2.2 制备 称取处方量的卡波姆于水中静置，溶胀过夜，加入丙二醇与甘油，滴加三乙醇胺，不断地搅拌成凝胶基质；将维生素B6溶于水中；将羟苯乙酯溶于乙醇，缓缓加入上述凝胶基质中，加水至足量，搅匀，即得透明均一的维生素B6凝胶剂。
3 含量测定
3.1 空白基质对照溶液的制备 按处方比例，配制空白基质，称取0.1g，加0.1mol/L的盐酸溶液适量至100ml的容量瓶中，振摇，并稀释至刻度，过滤后，取滤液作为空白基质对照溶液。
3.2 维生素B6对照品溶液的制备 取维生素B6对照品适量，用0.1mol/L的盐酸溶液溶解并配制成每1ml溶液中含10μg的维生素B6溶液，作为对照品溶液。
3.3 样品溶液的制备 称取样品0.1g加0.1mol/L的盐酸溶液适量至100ml的容量瓶中，振摇，并稀释至刻度，摇匀，过滤后，取滤液作为样品溶液。
3.4 波长的选择 分别取上述三种溶液，于200～400nm波长范围内扫描，结果见图1。结果发现对照品和样品溶液在291nm波长处有最大吸收，空白基质对照液在此波长处无吸收，由此可以采用0.1mol/L盐酸溶液作空白，在291nm处测定维生素B6的含量，其空白基质无干扰吸收。
3.5 标准曲线的绘制 精密称取维生素B6对照品25mg，置于100ml的容量瓶中，加0.1mol/L的盐酸溶液适量溶解稀释至刻度，作为对照品贮备液，分别取1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml的对照品贮备液于50ml容量瓶中，加0.1mol/L的盐酸溶液适量溶解稀释至刻度，摇匀。以空白基质的0.1mol/L盐酸溶液作空白，在291nm波长处测定吸光度，结果表明在5～25μg/ml范围内，吸光度（A）与浓度（C）呈良好的线性关系，回归方程为：A=0.025C+0.07，r=0.9990（n=5），表明该方法符合含量方法学验证的要求。 3.6 精密度试验 取“3.2”项下的维生素B6对照品溶液，照紫外分光光度法连续测6次，以吸光度计算，维生素B6吸光度的RSD为0.50%。结果表明该方法重复性较好。
3.7 回收率试验 为了考察该含量测定方法的准确度，进行了回收率试验，按处方量的80%、100%、120%，精密称取维生素B6对照品，分别加入空白基质按照样品的制备方法制成供试品，按“3.3”项下样品的制备方法，同法测定，计算回收率，结果回收率良好（见表1）。表明采用該方法测定维生素B6的含量准确度高，含量可控。
3.8 样品含量测定 取自制样品3批（20140901、20140902、20140903），按“3.3”项下样品的制备方法，同法测定，含量分别为98.32%、98.41%、98.37%。
3.9 样品的稳定性试验
3.9.1 离心试验 取制备好的3批样品10g，分别装入离心管中，以3000rpm离心，结果该凝胶剂无分层现象，稳定性较好。
3.9.2 加速试验[3] 将样品置于将样品置于40℃，75%RH的药品稳定性试验箱中，放置6个月，采用紫外分光光度法测定其三批样品含量，含量未发生变化，性状透明均匀，未发生分层现象。
3.9.3 长期试验[3] 将样品置于25℃，60%RH的药品稳定性试验箱中，放置6个月，其含量、性状也未发生变化。表明该凝胶剂在6个月内稳定。
4 讨论
凝胶剂作为新型的外用制剂，具有良好的生物相容性、易于涂布/局部给药后易于吸收、不污染衣物、稳定性好的特定[4]。卡波姆是丙烯酸与烷基蔗糖交联而成的丙烯酸聚合物，是一种广泛应用的高分子基质材料。卡波姆含有大量的羧基，可被碱性物质中和，当羧基游离时，由于负电荷相互排斥作用，使分子链呈现弥散伸展的状态，随后呈极大的膨胀状态，具有强大的粘性和良好的载药功能，同时具有良好的增稠性、成膜性[5]。研究表明，当羧基游离时，凝胶剂才具有较强的黏附能力[6]。本文采用水溶性的卡波姆作为基质，制成维生素B6凝胶剂后并采用了紫外分光光度法测定其含量，由于空白基质溶液在291nm处出无吸收，排除了干扰，使含量测定具有专属性，同时进行含量方法学验证，表明该方法重复性好，准确度高。在处理样品时，由于卡波姆为高分子材料，溶液出现浑浊现象，最后采用0.1mol/L的盐酸溶液作为溶剂，溶液较为澄清，利于紫外法的测定，从而排除了干扰。通过以上试验，表明采用紫外分光光度法测定该凝胶剂中维生素B6的含量，简单可行，质量可控，结果准确，可为工业化生产凝胶剂的质量控制提供依据。
参考文献
[1]徐勇智，范卫东，党登峰，等.维生素B6的合成研究进展[J].广东化工，2012，40（12）：50.
[2]Ahmad I，Qadeer K Nazim U.Vitamin B6：deficiency diseases and methods of analysis[J].Pakistan Journal of Pharmaceutical Sciences，2013，26 （5）：1057-1069.
[3]国家药典委员会.中国药典（二部）[S].北京：化学工业出版社，2005：附录178-179.
[4]王敏，薛晓东.卡波姆凝胶剂的临床应用研究进展[J].医学综述，2013，19（6）：1078-1079.
[5]梁斌，朱丹燕.新型凝胶剂研究进展[J].海峡药学，2012，24（3）：13-15.
[6]Al-Malah，Kamal I Azzam，Mohammed O J.Carbomer Dispersions：A New Calibration Method for Quantifying Shear-Thinning and Shear-Thickening Effects[J].Journal of Dispersion Science & Technology，2012，33（9）：1274-1283.
（收稿日期：2015.02.12）