【摘 要】
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目的 研究插头框F1基因(forkhead box F1,FOXF1)在肝癌中的表达及其对细胞增殖和凋亡的影响,探讨其分子机制.方法 应用real time PCR和Western blot分析癌旁组织和肝癌组织中FOXF1表达变化.MHCC-97H细胞和Huh7细胞分别分为3组:阴性对照组、siRNA-1组和siRNA-2组,分别转染NC-siRNA、FOXF1 siRNA-1和FOXF1 siRNA-2.应用MTT比色法分析转染FOXF1 siRNA对MHCC-97H和Huh7细胞增殖活力的影响;采用
【机 构】
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西安交通大学医学部基础医学院细胞生物学与遗传学系,西安710061;陕西省肿瘤医院肿瘤内科
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目的 研究插头框F1基因(forkhead box F1,FOXF1)在肝癌中的表达及其对细胞增殖和凋亡的影响,探讨其分子机制.方法 应用real time PCR和Western blot分析癌旁组织和肝癌组织中FOXF1表达变化.MHCC-97H细胞和Huh7细胞分别分为3组:阴性对照组、siRNA-1组和siRNA-2组,分别转染NC-siRNA、FOXF1 siRNA-1和FOXF1 siRNA-2.应用MTT比色法分析转染FOXF1 siRNA对MHCC-97H和Huh7细胞增殖活力的影响;采用流式细胞仪分析转染FOXF1 siRNA对MHCC-97H和Huh7细胞周期和细胞凋亡的影响;应用Western blot观察转染FOXF1 siRNA对MHCC-97H和Huh7细胞Wnt5a/β-catenin信号通路蛋白Wnt家族成员5a(wingless-type MMTV integration site family,member 5a,Wnt5a)、β-连环蛋白(β-cate-nin)、c-Myc和细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)表达的影响.结果 与癌旁组织比较,FOXF1在肝癌组织中表达显著减低(P<0.01).与转染NC-siRNA相比,转染FOXF1 siRNAs可显著降低MHCC-97H和Huh7细胞中FOXF1 mRNA与蛋白表达(P<0.01);与转染NC-siRNA相比,转染FOXF1 siRNAs可促进MHCC-97H和Huh7细胞增殖(P<0.01).与阴性对照组相比,FOXF1 siRNA-1组和siRNA-2组G1/G0期细胞显著减少(P<0.01),S期细胞显著增加(P<0.01),G2/M期无显著差异;与阴性对照组相比,FOXF1 siRNA-1组和siRNA-2组早期凋亡和晚期凋亡数量显著降低(P<0.01).与阴性对照组相比,FOXF1 siRNAs组Wnt5a/β-catenin信号通路相关蛋白Wnt5a、β-catenin、c-Myc和Cyclin D1表达增加(P<0.01),活性半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(active Caspase-3)表达下降(P<0.01).结论 沉默FOXF1通过上调Wnt5a/β-catenin信号通路促进肝癌细胞增殖,抑制细胞凋亡.
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