兔外周血内皮祖细胞培养及HTK基因体外修饰

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目的探讨兔外周血来源的内皮祖细胞(EPCs)经体外基因修饰后能否成功表达目的基因。方法分离兔外周血单个核细胞进行定向培养,观察细胞摄取DiI—Ac-LDL的能力,免疫荧光法检测EPCs的细胞表面标记。同时PCR扩增人组织激肽释放酶(HTK)基因,构建以GFP为报告基因的重组真核表达载体,转染体外培养的EPCs后,荧光显微镜下观察HTK—EGFP融合蛋白的表达,通过RT-PCR与ELISA方法检测HTK的表达水平。结果细胞培养5~6d开始出现成簇的短梭形贴壁细胞,15d后形成鹅卵石样细胞层,传代后的细胞能摄
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