【摘 要】
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利用PCR技术从柽柳cDNA文库中克隆出ThZFL目的基因序列,连接到pMD18-T载体,转化大肠杆菌DH5α感受态,经检验后提取质粒,用BamH I和EcoR I限制性内切酶双酶切pMD18-T-ThZFL载
【机 构】
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林木遗传育种国家重点实验室（东北林业大学）,嘉荫县林业局,林木遗传育种国家重点实验室（东北林业大学）
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利用PCR技术从柽柳cDNA文库中克隆出ThZFL目的基因序列,连接到pMD18-T载体,转化大肠杆菌DH5α感受态,经检验后提取质粒,用BamH I和EcoR I限制性内切酶双酶切pMD18-T-ThZFL载体和pG-BKT7-BD空载体,并将酶切产物胶回收后,用T4 DNA连接酶连接过夜后转化大肠杆菌DH5α感受态获得目的基因转化子pGBKT7-ThZFL,对转化子进行质粒PCR检验、质粒酶切检验、DNA测序鉴定。将测序检验正确的pG-BKT7-ThZFL转化子,转化酵母Y2Hgold菌株,对转化后的酵母涂布SD/-Trp、SD/-Trp/X、DDO、TDO平板,验证目的基因的自激活作用,通过对酵母生长曲线的测量验证诱饵蛋白的毒性作用。试验结果表明:用于筛选与ThZ-FL表达蛋白相互作用的靶蛋白的酵母诱饵载体构建成功,重组诱饵载体pGBKT7-ThZFL对酵母自身没有毒害作
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