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[摘 要]目的：建立十珍益母汤的的质量控制标准。方法：采用薄层色谱法对处方中当归、川芎进行定性鉴别；对当归中阿魏酸采用高效液相色谱法进行含量测定。结果：供试品色谱中，在与对照药材、对照品色谱的相应位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性无干扰；阿魏酸在0.0198～0.496μg与峰面积线性关系良好，r=0.9996，平均回收率为99.6%，RSD为1.86%。结论：所用方法有良好的重复性及稳定性，操作简便，能有效地控制该制剂的质量。
[关键词]十珍益母汤 工艺
中图分类号：F763文献标识码：A文章编号：1009-914X（2013）17-0223-01
十珍益母汤是由当归、川芎、熟地黄、益母草、桃仁、赤芍、蒲黄、炮姜、王不留行、甘草等十味中药组成的口服制剂，功能主治为补血养血，活血化瘀，温经止痛，通经下乳。适用于产后血虚，头晕无力，恶露不尽，小腹疼痛，乳汁不足及因瘀血不净而致出血淋漓不止。方中当归补血养血、川芎活血化瘀，二者同为君药。十珍益母汤是我院著名中医的经验良方，用于临床取得很好的疗效，为有效控制该制剂质量，采用薄层色谱法对方中当归、川芎进行定性鉴别；采用高效液相色谱法对当归中阿魏酸进行含量测定。完善了该制剂的质量控制标准。
一、材料
岛津LC 1ADVP高效液相色谱仪，手动点样器（瑞士），紫外分析仪ZF C（上海康禾光电仪器有限公司）；当归对照药材（北京中医药大学，批号1015120901），芍药苷对照品（中国生物制品检定所，批号121304 200812）。本实验所用药材均由河南大学药学院许文渊教授鉴定；十珍益母汤制剂成品3批（本院制剂室配制，批号090413，090507，090618）；所用化学试剂均为分析纯或色谱纯。
二、薄层鉴别
1、当归
分别取3批十珍益母汤样品各20mL，各加乙醇60mL，摇匀，滤过，滤液挥至无醇味，加乙酸乙酯振摇提取两次，每次15 mL，合并乙酸乙酯提取层，在水浴上浓缩至约2mL，作供试品溶液1～3号。另取当归对照药材2g，加水60mL微沸煎煮0.5h，放冷滤过，滤液加水稀释至20mL，按上述方法制成2mL当归对照品溶液。按处方比例及工艺，制备缺少当归的阴性样品，再按供试品溶液的制备方法制成2mL阴性对照溶液。照薄层色谱法[1]（中国药典2005年版一部VIB）试验，吸取上述溶液各5uL，分别点于同一以0.6%羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以正己烷乙酸乙酯（9∶1）为展开剂，展开后，取出晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性无干扰。1～3：供试品；4：阴性对照；5：对照药材当归薄层色谱图
2、川芎
分别取3批十珍益母汤样品各20mL，各加乙醇60mL，振摇5min，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇2mL使溶解，作供试品溶液1～3号。另取芍药苷对照品，加乙醇制成每1mL含2mg的溶液，作为对照品溶液。按处方比例及工艺，制备缺少川芎的阴性样品，再按供试品溶液的制备方法制成2mL阴性对照溶液。照薄层色谱法（中国药典2005年版一部VIB）试验，吸取上述溶液各4uL，分别点于同一硅胶G薄层板上。以三氯甲烷乙酸乙酯甲醇甲酸（40︰5︰10︰0.2）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的蓝紫色斑点，阴性无干扰。1～3：供试品；4：对照品；5：阴性对照图2 川芎薄层色谱图
三、含量测定
1、色谱条件与系统适用性试验
色谱柱：Kromasil C18（4.6mm×250mm，5 um）；流动相：甲醇水冰醋酸（30﹕68﹕2）；SPD 10AVP紫外检测器；检测波长：320nm；进样量：20μL；流速：1.0mL·min-1柱温：30℃；理论塔板数按阿魏酸峰计算大于4000，分离度R大于1.5。
2、溶液的制备
对照品溶液 取阿魏酸对照品适量，精密称取6.2mg，置于25mL棕色量瓶中，加甲醇溶液并定溶至刻度，摇匀，制得初始液；精密量取初始液1mL置50mL棕色量瓶中加甲醇至刻度，摇匀，作为对照品溶液。
供试品溶液 精密量取本品约3mL，置具塞锥形瓶中，加入甲醇50mL，超声处理（功率250W，频率20kHz）5min，放冷，再称定，用甲醇补足减失的的质量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
阴性对照溶液 按处方比例及工艺，制备缺少当归的阴性样品，再按供试品溶液的制备方法制备不含阿魏酸的阴性对照溶液。
3、线性关系考察
分别精密量取初始液0.2、0.4、1、2、5mL，置50mL棕色量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀。分别精密量取20μL，注入色谱仪，记录色谱图，以吸收峰面积为纵坐标，阿魏酸进样量为横坐标，绘制标准曲线，得线性回归方程：Y=117080. 4X+6652.612，r=0.9996。结果表明阿魏酸在0.0198～0.496μg范围内线性关系良好。
4、精密度试验
取“1、”项下对照品溶液20μL，在上述色谱条件下连续进样5次，记录色谱图，RSD为1.26%，结果表明精密度良好。
5、稳定性试验
精密量取对照品溶液在0，1，2，3，4，5h，连续进样6次，进样量为20μL，测得峰面积值，RSD为1.20%（n=6），结果表明阿魏酸在5h内稳定。
6、重复性试验
精密吸取同一批（090413）样品3mL，5份，分别照供试品制备方法，制备供试品溶液，在上述色谱条件下，测定含量，RSD为1.65%，结果表明重复性良好。
7、干扰试验
分别精密量取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各20μL，按上述色谱条件分别进行测定峰，阿魏酸与其他组分能达到基线分层，阴性对照无干扰。A：供试品溶液；B：对照品溶液；C：阴性样品溶液图3 高效液相色谱图
8、加样回收率试验
精密吸取已知阿魏酸含量的同一批（090413）样品5份，分别加入阿魏酸对照品初始液2mL，按供试品制备方法，制得供试品溶液，照上述条件进行检测，结果见表1。
9、样品含量测定
精密吸取样品溶液20μL，按上述色谱条件测定3批制剂中阿魏酸含量，结果3批含量分别为0.19%，0.21%，0.21%。表1 加样回收率试验结果
四、讨论
本实验在阿魏酸的含量测定中，先采用药典当归项下的流动相实验，结果被测峰与杂质峰分离不开，后改为本研究所用流动相，结果显示分离完全。同时对检测波长也进行了考察，结合紫外吸收光谱图，选择320nm作为检测波长。
选择薄层色谱对中药口服制剂中的当归、川芎进行定性鉴别，方法及试验条件的选定根据当归、川芎所含主要成分的性质而定。当归的主要成分为阿魏酸，先用乙醇溶解，再用乙酸乙酯提取药材中的专属性成分，解决了其它成分的干扰问题。川芎的主要成分为芍药苷，实验中用乙醇作为提取溶解溶液，结果表明效果好，方法简便。因其它药材成分对当归、川芎的屏蔽作用，采用薄层层析法，作为鉴别方法，专属性较强，灵敏度高，重现性好。选用高效液相法测定阿魏酸的含量，方法简便、准确，重復性好，提高了制剂质量的可控性。
参考文献
[1] 何雪梅，中药制剂十珍益母汤的质量控制，论文网，2011，06.
[2] 张钦德.中药制剂分析技术实验指导.北京：中国中医药出版社，2006，14.
[关键词]十珍益母汤 工艺
中图分类号：F763文献标识码：A文章编号：1009-914X（2013）17-0223-01
十珍益母汤是由当归、川芎、熟地黄、益母草、桃仁、赤芍、蒲黄、炮姜、王不留行、甘草等十味中药组成的口服制剂，功能主治为补血养血，活血化瘀，温经止痛，通经下乳。适用于产后血虚，头晕无力，恶露不尽，小腹疼痛，乳汁不足及因瘀血不净而致出血淋漓不止。方中当归补血养血、川芎活血化瘀，二者同为君药。十珍益母汤是我院著名中医的经验良方，用于临床取得很好的疗效，为有效控制该制剂质量，采用薄层色谱法对方中当归、川芎进行定性鉴别；采用高效液相色谱法对当归中阿魏酸进行含量测定。完善了该制剂的质量控制标准。
一、材料
岛津LC 1ADVP高效液相色谱仪，手动点样器（瑞士），紫外分析仪ZF C（上海康禾光电仪器有限公司）；当归对照药材（北京中医药大学，批号1015120901），芍药苷对照品（中国生物制品检定所，批号121304 200812）。本实验所用药材均由河南大学药学院许文渊教授鉴定；十珍益母汤制剂成品3批（本院制剂室配制，批号090413，090507，090618）；所用化学试剂均为分析纯或色谱纯。
二、薄层鉴别
1、当归
分别取3批十珍益母汤样品各20mL，各加乙醇60mL，摇匀，滤过，滤液挥至无醇味，加乙酸乙酯振摇提取两次，每次15 mL，合并乙酸乙酯提取层，在水浴上浓缩至约2mL，作供试品溶液1～3号。另取当归对照药材2g，加水60mL微沸煎煮0.5h，放冷滤过，滤液加水稀释至20mL，按上述方法制成2mL当归对照品溶液。按处方比例及工艺，制备缺少当归的阴性样品，再按供试品溶液的制备方法制成2mL阴性对照溶液。照薄层色谱法[1]（中国药典2005年版一部VIB）试验，吸取上述溶液各5uL，分别点于同一以0.6%羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以正己烷乙酸乙酯（9∶1）为展开剂，展开后，取出晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性无干扰。1～3：供试品；4：阴性对照；5：对照药材当归薄层色谱图
2、川芎
分别取3批十珍益母汤样品各20mL，各加乙醇60mL，振摇5min，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇2mL使溶解，作供试品溶液1～3号。另取芍药苷对照品，加乙醇制成每1mL含2mg的溶液，作为对照品溶液。按处方比例及工艺，制备缺少川芎的阴性样品，再按供试品溶液的制备方法制成2mL阴性对照溶液。照薄层色谱法（中国药典2005年版一部VIB）试验，吸取上述溶液各4uL，分别点于同一硅胶G薄层板上。以三氯甲烷乙酸乙酯甲醇甲酸（40︰5︰10︰0.2）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的蓝紫色斑点，阴性无干扰。1～3：供试品；4：对照品；5：阴性对照图2 川芎薄层色谱图
三、含量测定
1、色谱条件与系统适用性试验
色谱柱：Kromasil C18（4.6mm×250mm，5 um）；流动相：甲醇水冰醋酸（30﹕68﹕2）；SPD 10AVP紫外检测器；检测波长：320nm；进样量：20μL；流速：1.0mL·min-1柱温：30℃；理论塔板数按阿魏酸峰计算大于4000，分离度R大于1.5。
2、溶液的制备
对照品溶液 取阿魏酸对照品适量，精密称取6.2mg，置于25mL棕色量瓶中，加甲醇溶液并定溶至刻度，摇匀，制得初始液；精密量取初始液1mL置50mL棕色量瓶中加甲醇至刻度，摇匀，作为对照品溶液。
供试品溶液 精密量取本品约3mL，置具塞锥形瓶中，加入甲醇50mL，超声处理（功率250W，频率20kHz）5min，放冷，再称定，用甲醇补足减失的的质量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
阴性对照溶液 按处方比例及工艺，制备缺少当归的阴性样品，再按供试品溶液的制备方法制备不含阿魏酸的阴性对照溶液。
3、线性关系考察
分别精密量取初始液0.2、0.4、1、2、5mL，置50mL棕色量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀。分别精密量取20μL，注入色谱仪，记录色谱图，以吸收峰面积为纵坐标，阿魏酸进样量为横坐标，绘制标准曲线，得线性回归方程：Y=117080. 4X+6652.612，r=0.9996。结果表明阿魏酸在0.0198～0.496μg范围内线性关系良好。
4、精密度试验
取“1、”项下对照品溶液20μL，在上述色谱条件下连续进样5次，记录色谱图，RSD为1.26%，结果表明精密度良好。
5、稳定性试验
精密量取对照品溶液在0，1，2，3，4，5h，连续进样6次，进样量为20μL，测得峰面积值，RSD为1.20%（n=6），结果表明阿魏酸在5h内稳定。
6、重复性试验
精密吸取同一批（090413）样品3mL，5份，分别照供试品制备方法，制备供试品溶液，在上述色谱条件下，测定含量，RSD为1.65%，结果表明重复性良好。
7、干扰试验
分别精密量取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各20μL，按上述色谱条件分别进行测定峰，阿魏酸与其他组分能达到基线分层，阴性对照无干扰。A：供试品溶液；B：对照品溶液；C：阴性样品溶液图3 高效液相色谱图
8、加样回收率试验
精密吸取已知阿魏酸含量的同一批（090413）样品5份，分别加入阿魏酸对照品初始液2mL，按供试品制备方法，制得供试品溶液，照上述条件进行检测，结果见表1。
9、样品含量测定
精密吸取样品溶液20μL，按上述色谱条件测定3批制剂中阿魏酸含量，结果3批含量分别为0.19%，0.21%，0.21%。表1 加样回收率试验结果
四、讨论
本实验在阿魏酸的含量测定中，先采用药典当归项下的流动相实验，结果被测峰与杂质峰分离不开，后改为本研究所用流动相，结果显示分离完全。同时对检测波长也进行了考察，结合紫外吸收光谱图，选择320nm作为检测波长。
选择薄层色谱对中药口服制剂中的当归、川芎进行定性鉴别，方法及试验条件的选定根据当归、川芎所含主要成分的性质而定。当归的主要成分为阿魏酸，先用乙醇溶解，再用乙酸乙酯提取药材中的专属性成分，解决了其它成分的干扰问题。川芎的主要成分为芍药苷，实验中用乙醇作为提取溶解溶液，结果表明效果好，方法简便。因其它药材成分对当归、川芎的屏蔽作用，采用薄层层析法，作为鉴别方法，专属性较强，灵敏度高，重现性好。选用高效液相法测定阿魏酸的含量，方法简便、准确，重復性好，提高了制剂质量的可控性。
参考文献
[1] 何雪梅，中药制剂十珍益母汤的质量控制，论文网，2011，06.
[2] 张钦德.中药制剂分析技术实验指导.北京：中国中医药出版社，2006，14.