【摘 要】
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目的利用定量蛋白组学技术探索高糖状态下人视网膜微血管周细胞(HRMPCs)的蛋白表达变化，为糖尿病视网膜病变(DR)早期周细胞缺失的机制研究提供新的蛋白靶点。方法将HRMPCs分为对照组和高糖组，分别用葡萄糖浓度为25 mmol/L和35 mmol/L的DMEM培养基培养48 h，细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法测定各组HRMPCs活性。提取各组细胞的蛋白并进行酶切，得到肽段，取2 μg肽段进行
【机 构】
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天津医科大学眼科医院 眼视光学院 眼科研究所 天津市视网膜功能与疾病重点实验室 300384,天津医科大学眼科医院 眼视光学院 眼科研究所 天津市视网膜功能与疾病重点实验室 300384,天津医科大学
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目的利用定量蛋白组学技术探索高糖状态下人视网膜微血管周细胞(HRMPCs)的蛋白表达变化，为糖尿病视网膜病变(DR)早期周细胞缺失的机制研究提供新的蛋白靶点。
方法将HRMPCs分为对照组和高糖组，分别用葡萄糖浓度为25 mmol/L和35 mmol/L的DMEM培养基培养48 h，细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法测定各组HRMPCs活性。提取各组细胞的蛋白并进行酶切，得到肽段，取2 μg肽段进行飞行时间质谱(TOF-MS)检测，质谱的采集模式为数据依赖性(DDA)，对得到的蛋白表达信息进行生物信息学分析。
结果高糖组的HRMPCs数量较对照组明显减少，且高糖组的部分细胞出现体积变小、变形等改变。CCK-8实验结果显示，高糖组HRMPCs吸光度(A450)值为0.75±0.04，明显低于对照组的0.91±0.05，差异有统计学意义(t＝5.784，P＝0.000 2)。本研究共鉴定到1 972个可定量蛋白，其中差异蛋白有54个(差异倍数>1.5)。相比于对照组，高糖组细胞中上调的差异蛋白有13个，包括CTNNB1、CTBP2等，下调的差异蛋白有41个，包括SQSTM1、HMGCS1等。这些差异蛋白主要参与了三羧酸循环、有氧呼吸等生物学过程。
结论高糖刺激HRMPCs会改变多种蛋白的表达，进而影响细胞的呼吸作用和ATP的生成，最终导致周细胞的缺失。
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