【摘 要】
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目的 探究宫颈癌细胞外泌体miR-21对淋巴管生成的影响及机制.方法 提取宫颈上皮细胞HcerEpic、宫颈癌细胞HeLa和C-33A三者分泌的外泌体(HcerEpic exo、HeLa exo和C-33A exo),采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测HcerEpic、HeLa、C-33A及其所分泌外泌体中miR-21的表达;HeLa 细胞转染 miR-21 mimic、miR-21 inhibitor、Negative control,提取转染后 HeLa 细胞的外泌体(HeLa/miR-21
【机 构】
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陕西省肿瘤医院妇瘤科,西安710061
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目的 探究宫颈癌细胞外泌体miR-21对淋巴管生成的影响及机制.方法 提取宫颈上皮细胞HcerEpic、宫颈癌细胞HeLa和C-33A三者分泌的外泌体(HcerEpic exo、HeLa exo和C-33A exo),采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测HcerEpic、HeLa、C-33A及其所分泌外泌体中miR-21的表达;HeLa 细胞转染 miR-21 mimic、miR-21 inhibitor、Negative control,提取转染后 HeLa 细胞的外泌体(HeLa/miR-21 mimic exo、HeLa/miR-21 inhibitor exo、HeLa/miR-NC exo),将上述外泌体与淋巴管内皮细胞HLECs共孵育后检测HLECs中miR-21的表达及小管生成能力;采用双荧光素酶报告基因验证miR-21和酪氨酸磷酸酶基因(PTEN)的靶向关系,检测转染siRNA抑制蛋白(PTEN)表达后的小管形成及磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)和蛋白激酶B(AKT)磷酸化水平;将HeLa/miR-21 mimic exo与HLECs共孵育后转染PTEN质粒(HeLa/miR-21 mimic exo+PTEN),然后检测小管形成及PI3K和AKT磷酸化水平.结果 miR-21 高表达于 HeLa、C-33A 及二者外泌体;与 HeLa exo、C-33A exo、HeLa/miR-21 mimic exo共孵育后HLECs中miR-21表达显著上调,HeLa/miR-21 mimic exo显著促进小管形成;PTEN为miR-21靶基因,抑制PTEN表达后,HLECs小管形成及PI3K和AKT磷酸化水平均显著增加;HeLa/miR-21 mimic exo+PTEN HLECs小管形成及PI3K和AKT磷酸化水平均显著低于HeLa/miR-21 mimic exo.结论 外泌体miR-21通过激活PTEN/PI3K/AKT信号通路而诱导HLECs淋巴管生成.
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