【摘 要】
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目的探讨miR-543在胶质瘤SHG-44细胞侵袭、迁移中的作用、分子靶点及可能的作用机制。方法采用miR-543 mimic、inhibitor及各自NC序列转染胶质瘤SHG-44细胞,获得5组细胞,分别
【机 构】
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沈阳医学院附属第二医院,沈阳市第六人民医院,沈阳市第七人民医院
【基金项目】
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辽宁省科学技术计划项目(20170540873)
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目的探讨miR-543在胶质瘤SHG-44细胞侵袭、迁移中的作用、分子靶点及可能的作用机制。方法采用miR-543 mimic、inhibitor及各自NC序列转染胶质瘤SHG-44细胞,获得5组细胞,分别分为Control组(无转染)、mimic NC组(转染mimic NC片段)、inhibitor NC组(转染inhibitor NC片段)、miR-543 mimic组(转染miR-543 mimic)、miR-543 inhibitor组(转染miR-543 inhibitor);Real-time PCR检测各组转染后miR-543表达水平;划痕实验检测细胞迁移能力;Transwell小室实验检测细胞侵袭能力;明胶酶谱实验检测细胞上清基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)活性;Real-time PCR及Western blot检测细胞中微小RNA 543(miR-543)潜在作用靶点局部黏着斑激酶(FAK)、上皮间质转化调控蛋白(TWIST1)、多囊肾病蛋白2(PKD2)mRNA及蛋白水平的表达;Western blot检测细胞中蛋白激酶B(AKT)通路活化情况。结果与Control组相比,mimic NC组及inhibitor NC组细胞的侵袭及迁移能力、FAK、TWIST1、PKD2、MMP-2、MMP-9表达及AKT的磷酸化水平差异均无统计学意义(P均>0.05);与mimic NC组相比,miR-543 mimic组能够有效抑制SHG-44细胞的迁移及侵袭能力,抑制MMP-2、MMP-9活性,抑制FAK、TWIST1、PKD2分子和蛋白水平的表达,抑制AKT的磷酸化(P均<0.01);与inhibitor NC组相比,miR-543 inhibitor组细胞迁移能力增强,侵袭能力升高,MMP-2、MMP-9活性增强,FAK、TWIST1、PKD2表达上调,AKT通路磷酸化水平升高(P均<0.05)。结论 miR-543可能通过对下游靶基因的调节影响AKT通路活化,进而影响胶质瘤SHG-44细胞的迁移及侵袭。
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