【摘 要】
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目的 对大鼠腰椎及尾椎间盘髓核细胞(nucleus pulposus cells,NPCs)进行体外分离培养、形态学鉴定,并对比研究细胞生长特性.方法 分别取8周龄SD大鼠腰段(L1、2 ～L6、S1)及尾段
【机 构】
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东南大学附属中大医院脊柱外科,南京,210009
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目的 对大鼠腰椎及尾椎间盘髓核细胞(nucleus pulposus cells,NPCs)进行体外分离培养、形态学鉴定,并对比研究细胞生长特性.方法 分别取8周龄SD大鼠腰段(L1、2 ～L6、S1)及尾段(C1、2～C17、18)椎间盘,采用组织贴壁法分离培养NPCs;倒置相差显微镜观察细胞形态变化,行HE、甲苯胺蓝及Ⅱ型胶原免疫组织化学染色观察;分别取两组第1～5代细胞测定细胞活力(锥虫蓝染色)、总蛋白含量(BCA法)及衰老水平[衰老相关β-半乳糖苷酶(senescence-associated β-galactosidase,SA-β-gal)染色];取第1代细胞行增殖能力(细胞计数试剂盒8法)测定.结果 成功分离培养各节段椎间盘NPCs.尾段原代NPCs贴壁时间及生长达90％融合时间显著少于腰段原代NPCs (P＜0.05).HE染色示NPCs细胞质呈粉色,细胞核呈卵圆形,均一蓝黑色;甲苯胺蓝染色示NPCs细胞质呈蓝色;Ⅱ型胶原免疫组织化学染色示细胞质见黄褐色颗粒沉着核周区显著,细胞核呈蓝黑色.腰段组细胞以长梭形为主,尾段组以多角形、不规则形为主.细胞活力测定示腰段及尾段两组间及两组内各代次间NPCs活力比较差异均无统计学意义(P＞0.05).增殖能力检测示,腰段细胞培养4～5d后进入对数生长期,尾段细胞培养3d后即进入对数生长期;培养3～9d尾段细胞吸光度(A)值高于腰段细胞(P＜0.05).总蛋白合成检测示,尾段及腰段NPCs总蛋白含量组内各代次间比较差异均无统计学意义(P＞0.05),尾段各代NPCs总蛋白含量均显著高于同代腰段NPCs(P＜0.05).衰老水平检测示,两组间第1、2、3代比较老化细胞阳性率差异无统计学意义(P＞0.05),腰段组第4、5代老化细胞阳性率较同代尾段细胞高,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 与同时间点大鼠腰椎间盘NPCs相比,尾椎间盘NPCs生长状态更佳,更适宜作为研究椎间盘退变的种子细胞.
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