【摘 要】
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目的 利用pRNAT-U6.1/Neo质粒构建靶向NFAT1基因的3个shRNA,为下一步探索肺癌基因治疗的RNA干扰途径奠定基础.方法 设计3对shRNA(NFAT1-sh-1、NFAT1-sh-2、NFAT1-sh-3),以人
【机 构】
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100700,北京军区总医院胸外科
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目的 利用pRNAT-U6.1/Neo质粒构建靶向NFAT1基因的3个shRNA,为下一步探索肺癌基因治疗的RNA干扰途径奠定基础.方法 设计3对shRNA(NFAT1-sh-1、NFAT1-sh-2、NFAT1-sh-3),以人类基因同源性差的无关序列(NFAT1-sh-NC)作为阴性对照.筛选与人类其他基因同源性小、特异性针对目的基因的siRNA.合成并克隆至带有U6启动子的pRNAT -U6.1/Neo质粒中,构建质粒表达载体,通过凝胶电泳鉴定后转化至大肠杆菌中进行培养,并提取质粒进行DNA测序鉴定.结果 成功构建和筛选出靶向NFAT1基因的3对shRNA质粒表达载体,GC比例为40％～55％.结论 构建的3个靶向NFAT1基因shRNA质粒表达载体有助于肺癌靶向基因治疗RNA干扰的研究.为筛选有效的基因干扰载体,以及对荷瘤肺癌裸鼠靶向RNAi抗肿瘤细胞生长的研究鉴定了基础.
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