N端融合不同长度转位肽的重组粒酶B抑制细胞生长作用的比较

来源 :生物工程学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户：clarrencewarren

【摘要】

：

采用重组PCR法将粒酶B基因的N端信号队和酸性二肽编码序列去除，与两种不同长度的绿脓杆菌外毒素(PE)转位肽序列分别连接，将它们插入pIND诱导表达载体，通过脂质体法与pVgRXR辅助

【作者】

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赵晶王智于翠娟曹云新张莉王成济杨安钢

【机构】

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第四军医大学生物化学与分子生物学教研室,第四军医大学免疫学教研室

【出处】

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生物工程学报

【发表日期】

：

2004年4期

【关键词】

：

粒酶B 绿脓杆菌外毒素诱导表达生长抑制作用 granzyme B Pseudomonas exotoxin A (PE) inducible expre

【基金项目】

：

国家高技术“863”计划基金资助 (No.2 0 0 1AA2 1710 1) ,,国家杰出青年科学基金资助 (No .3 992 5 0 3 6),,全军医药卫生科研基金资助(No.0 1Z0 90 )~~

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采用重组PCR法将粒酶B基因的N端信号队和酸性二肽编码序列去除，与两种不同长度的绿脓杆菌外毒素(PE)转位肽序列分别连接，将它们插入pIND诱导表达载体，通过脂质体法与pVgRXR辅助质粒共转染HeLa细胞．建立了重组PE Ⅱ-GrBa基因的诱导表达细胞系：松甾酮A诱导唇Westem印迹检测到目的基因的表达，间接免疫荧光观察到表达细胞出现多核巨细胞的异常形态两种表达的PE Ⅱ-GrBa融合蛋白均能够切割粒酶B的细胞内源性和外源性底物，并且使细胞生长速度减慢。其中，PE Ⅱ(aa 280-358)-GrBa

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