【摘 要】
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目的:构建STAT1基因RNA干扰(RNAi)慢病毒载体并测定其基因沉默效应.方法:根据人STAT1基因序列,设计干扰序列,将Oligo退火成双链并连接穿梭载体pLKO-1-EGFP-puro-shRNA,构建shRNA
【机 构】
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北京中医药大学东直门医院东区外科,北京中医药大学第三附属医院医务处,北京中医药大学东直门医院外科
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目的:构建STAT1基因RNA干扰(RNAi)慢病毒载体并测定其基因沉默效应.方法:根据人STAT1基因序列,设计干扰序列,将Oligo退火成双链并连接穿梭载体pLKO-1-EGFP-puro-shRNA,构建shRNA慢病毒载体质粒,并转化至感受态细胞DH5 α,进行测序验证.在脂质体介导下转染293T细胞,包装生产慢病毒.慢病毒载体转染人肝癌细胞MHCC97L的STAT1过表达瘤株(MHCC97L-stat1),用Real-time PCR和Westem Blot检测RNAi组(MHCC97L-sta
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