【摘 要】
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为了确定Cry9Aa3蛋白对亚洲玉米螟(Ostrinia furnacalis)和小菜蛾(Plutella xylostella)的最小活性区,根据NCBI BLAST比对结果与SWISS-MODEL同源建模结果,设计了12对截短引物
【机 构】
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安徽省微生物防治省重点实验室,中国农业科学院植物保护研究所植物病虫害生物学国家重点实验室
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为了确定Cry9Aa3蛋白对亚洲玉米螟(Ostrinia furnacalis)和小菜蛾(Plutella xylostella)的最小活性区,根据NCBI BLAST比对结果与SWISS-MODEL同源建模结果,设计了12对截短引物,以cry9Aa3全长序列为模板,扩增出了12种不同截短片段,与pEB载体重组后的阳性克隆,转入大肠杆菌(Escherichia coli)菌株Rosetta(DE3)诱导表达,提取蛋白.对小菜蛾和亚洲玉米螟的生物学活性测定,发现截短蛋白Cry9Aa3-45～700、Cry9Aa3-1～654,对小菜蛾和亚洲玉米螟有较高的活性,其中截短蛋白Cry9Aa3-45～700对小菜蛾和亚洲玉米螟的LC50分别为5.27、7.56 μg/g,截短蛋白Cry9Aa3 1～654对小菜蛾和亚洲玉米螟的LC50分别为7.76、7.79μg/g,与阳性对照无显著差异,而截短蛋白Cry9Aa3-1～653和Cry9Aa3-46～700(LC50＞200 μg/g)对幼虫几乎丧失生物学活性.这说明Cry9Aa3蛋白对小菜蛾和亚洲玉米螟的杀虫活性区相同,最小活性区位于451和654P之间.
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