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摘要：以4个不同表现型石榴品种‘泰山红’、‘大青皮’、‘墨石榴’和‘三白’为试材，利用高效液相色谱法（HPLC）分别测定果皮和果汁中杨梅酮、槲皮素、木犀草素、山奈素、芹菜素等类黄酮含量。结果表明：4个品种的果皮、果汁中均存在这5种类黄酮物质，其中以杨梅酮和槲皮素含量最高。4个品种间类黄酮含量有差异。‘三白’石榴果皮和果汁中的类黄酮总量均最高，分别达到377.5μg/g和82.0μg/g，‘泰山红’、‘大青皮’和‘墨石榴’果皮和果汁中类黄酮含量依次降低。此外，同一品种不同部位也有差异，‘三白’果皮类黄酮总量是果汁的4.60倍，而‘泰山红’、‘墨石榴’和‘大青皮’依次是3.51、4.45、4.28倍。表明类黄酮含量在石榴不同品种以及同一品种果皮和果汁中均存在差异性。
关键词：石榴；果皮；果汁；类黄酮；HPLC
中图分类号：S665.401文献标识号：A文章编号：1001-4942（2014）01-0040-04
石榴（PunicagranatumL.）是传统的栽培果树之一，具有较高的食用、药用及观赏价值。目前，全世界有1000多个栽培品种[2]。石榴在中国已有2000多年的栽培历史，据不完全统计，我国栽培面积目前已达到11.7×104hm2左右，居世界第一位，形成了山东枣庄、陕西临潼、新疆叶城、云南蒙自、四川会理、河南开封、安徽怀远等几个石榴适生栽培区。
类黄酮具有结构和特征的多样性，广泛存在于水果、蔬菜、坚果、种子和茎皮中，是植物体内最重要的次生代谢产物之一，也是人类膳食不可缺少的组成部分[1]。研究表明，石榴中富含类黄酮物质，其果实提取物对心脑血管疾病、肿瘤、细菌感染等具有显著的防治作用[3～8]。虽然石榴中的类黄酮研究开展较早，但已往对类黄酮研究主要集中在定性和总量测定[9，10]方面，且大都局限于单一品种。利用高效液相色谱法测定石榴类黄酮物质含量的研究较少[11]，对不同石榴品种果皮和果汁中类黄酮物质组分含量的研究尚未见相关报道。本试验以4个不同表现型石榴品种为试材，采用高效液相色谱法（HPLC）对果皮、果汁中类黄酮组分（杨梅酮、槲皮素、木犀草素、山奈素、芹菜素）的含量进行了提取和测定，以揭示不同石榴品种类黄酮组分在含量上的差异，为石榴类黄酮物质的开发利用和良种选育提供理论依据。
1材料与方法
1.1试验材料
1.1.1供试品种以山东省果树研究所石榴种质资源圃中的‘泰山红’、‘大青皮’、‘三白’和‘墨石榴’4个石榴品种为试材。该资源圃立地条件一致，常规管理。
1.1.2试剂以杨梅酮、槲皮素、木犀草素、山奈素、芹菜素等5种类黄酮物质为标准品，其中杨梅酮购自Sigma公司、芹菜素购自ChromaDex公司，槲皮素、木犀草素和山奈素购自中国药品生物制品检定所。
1.1.3试验设计每个品种每3株为一个小区，随机区组排列，重复3次。
1.2试验方法
取样时，选取树势一致的植株，自树体东南西北4个方向及高度一致的果枝采集果实。采摘后低温条件下带回实验室，用削皮刀取得果皮，籽粒手工压榨后经三层纱布过滤得到果汁。
采用Aglient1260高效液相色谱仪（美国安捷伦公司）进行测定分析，甲醇、甲酸均为色谱级。
1.2.1类黄酮的提取取0.5g果皮和10g果汁，分别放于40ml62.5%的甲醇水溶液中，添加BHA（2g/L）。仔细加入6mol/LHCl10ml，使总体积达50ml，然后提取液在90℃水浴中回流2h，冷却至室温，超声处理5min。取提取液10ml，经0.45μm滤膜过滤后用于HPLC测定。
1.2.2类黄酮标准溶液的配置分别取杨梅酮、槲皮素、木犀草素、山奈素、芹菜素1mg，用甲醇分别定容至5ml，超声处理10min，得每个标准品的标准溶液，各取1ml混匀得到5种标准品混合液，配好的溶液于-20℃保存。
1.2.3HPLC分析采用Aglient1260高效液相色谱仪，配备Agilent1260VWD可变波长检测器。色谱柱为ZORBAXSBC18柱（150mm×4.6mm，5μm），柱温30℃。采用2%甲酸（A液）和甲醇溶液（B液）为流动相，进样量为10μl。其中类黄酮分析时的流速为0.8ml/min，梯度洗脱程序：0～45min（80%A液，20%B液），45～60min（20%A液，80%B液）。
1.2.4类黄酮的定性及定量分析定性分析根据标准品的保留时间确定。定量分析采用标准曲线法。类黄酮总量为各组分含量的总和。
1.2.5统计分析采用Anova对数据进行差异显著性分析。
2结果与分析
2.1类黄酮标准品色谱图
类黄酮在确定的色谱条件下，取10μl标准品混合液进样分析，得到标准品色谱图（图1）。5种类黄酮标准品流出顺序分别为杨梅酮、槲皮素、木犀草素、山奈素和芹菜素。
关键词：石榴；果皮；果汁；类黄酮；HPLC
中图分类号：S665.401文献标识号：A文章编号：1001-4942（2014）01-0040-04
石榴（PunicagranatumL.）是传统的栽培果树之一，具有较高的食用、药用及观赏价值。目前，全世界有1000多个栽培品种[2]。石榴在中国已有2000多年的栽培历史，据不完全统计，我国栽培面积目前已达到11.7×104hm2左右，居世界第一位，形成了山东枣庄、陕西临潼、新疆叶城、云南蒙自、四川会理、河南开封、安徽怀远等几个石榴适生栽培区。
类黄酮具有结构和特征的多样性，广泛存在于水果、蔬菜、坚果、种子和茎皮中，是植物体内最重要的次生代谢产物之一，也是人类膳食不可缺少的组成部分[1]。研究表明，石榴中富含类黄酮物质，其果实提取物对心脑血管疾病、肿瘤、细菌感染等具有显著的防治作用[3～8]。虽然石榴中的类黄酮研究开展较早，但已往对类黄酮研究主要集中在定性和总量测定[9，10]方面，且大都局限于单一品种。利用高效液相色谱法测定石榴类黄酮物质含量的研究较少[11]，对不同石榴品种果皮和果汁中类黄酮物质组分含量的研究尚未见相关报道。本试验以4个不同表现型石榴品种为试材，采用高效液相色谱法（HPLC）对果皮、果汁中类黄酮组分（杨梅酮、槲皮素、木犀草素、山奈素、芹菜素）的含量进行了提取和测定，以揭示不同石榴品种类黄酮组分在含量上的差异，为石榴类黄酮物质的开发利用和良种选育提供理论依据。
1材料与方法
1.1试验材料
1.1.1供试品种以山东省果树研究所石榴种质资源圃中的‘泰山红’、‘大青皮’、‘三白’和‘墨石榴’4个石榴品种为试材。该资源圃立地条件一致，常规管理。
1.1.2试剂以杨梅酮、槲皮素、木犀草素、山奈素、芹菜素等5种类黄酮物质为标准品，其中杨梅酮购自Sigma公司、芹菜素购自ChromaDex公司，槲皮素、木犀草素和山奈素购自中国药品生物制品检定所。
1.1.3试验设计每个品种每3株为一个小区，随机区组排列，重复3次。
1.2试验方法
取样时，选取树势一致的植株，自树体东南西北4个方向及高度一致的果枝采集果实。采摘后低温条件下带回实验室，用削皮刀取得果皮，籽粒手工压榨后经三层纱布过滤得到果汁。
采用Aglient1260高效液相色谱仪（美国安捷伦公司）进行测定分析，甲醇、甲酸均为色谱级。
1.2.1类黄酮的提取取0.5g果皮和10g果汁，分别放于40ml62.5%的甲醇水溶液中，添加BHA（2g/L）。仔细加入6mol/LHCl10ml，使总体积达50ml，然后提取液在90℃水浴中回流2h，冷却至室温，超声处理5min。取提取液10ml，经0.45μm滤膜过滤后用于HPLC测定。
1.2.2类黄酮标准溶液的配置分别取杨梅酮、槲皮素、木犀草素、山奈素、芹菜素1mg，用甲醇分别定容至5ml，超声处理10min，得每个标准品的标准溶液，各取1ml混匀得到5种标准品混合液，配好的溶液于-20℃保存。
1.2.3HPLC分析采用Aglient1260高效液相色谱仪，配备Agilent1260VWD可变波长检测器。色谱柱为ZORBAXSBC18柱（150mm×4.6mm，5μm），柱温30℃。采用2%甲酸（A液）和甲醇溶液（B液）为流动相，进样量为10μl。其中类黄酮分析时的流速为0.8ml/min，梯度洗脱程序：0～45min（80%A液，20%B液），45～60min（20%A液，80%B液）。
1.2.4类黄酮的定性及定量分析定性分析根据标准品的保留时间确定。定量分析采用标准曲线法。类黄酮总量为各组分含量的总和。
1.2.5统计分析采用Anova对数据进行差异显著性分析。
2结果与分析
2.1类黄酮标准品色谱图
类黄酮在确定的色谱条件下，取10μl标准品混合液进样分析，得到标准品色谱图（图1）。5种类黄酮标准品流出顺序分别为杨梅酮、槲皮素、木犀草素、山奈素和芹菜素。