【摘 要】
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目的 研究星形胶质细胞分泌的EGF在他克莫司(FK506)促进神经细胞突起生长过程中的作用.方法 取2日龄SD大鼠和孕15 d SD大鼠,分别体外分离培养脊髓星形胶质细胞和脊髓神经元细
【机 构】
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南京医科大学第一附属医院骨科 南京,210029;南京医科大学生理教研室
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目的 研究星形胶质细胞分泌的EGF在他克莫司(FK506)促进神经细胞突起生长过程中的作用.方法 取2日龄SD大鼠和孕15 d SD大鼠,分别体外分离培养脊髓星形胶质细胞和脊髓神经元细胞,分别进行免疫荧光染色鉴定.将脊髓星形胶质细胞分为两组,实验组采用20 μmol/L FK506培养液培养,对照组用不含FK506的培养液培养,24 h后收集上清制备条件培养液和细胞,分别行ELISA检查和实时荧光定量PCR (real-time quantitative PCR,RT-qPCR)检测EGF蛋白和基因表达.分别使用实验组和对照组条件培养液(分别为A、B组)和加入EGF中和抗体中和后的对照组和实验组条件培养液(分别为C、D组)培养脊髓神经元细胞,3d后对脊髓神经元细胞的突起长度进行测量,比较神经突总长度和最长神经突长度.结果 经免疫荧光染色鉴定,所培养细胞分别为脊髓星形胶质细胞和神经元细胞.ELISA检测示,实验组EGF含量为0.241±0.044,显著高于对照组的0.166±0.014(t=3.93,P=0.01);RT-qPCR检测得到了相同结果,实验组EGF基因相对表达量为1.12±0.25,显著高于对照组的0.46±0.11(t=5.78,P=0.00).神经突长度测量显示,C、D组神经突总长度和最长神经突长度均显著小于A、B组(P＜0.05),A组均明显大于B组(P＜0.05),C、D组间差异无统计学意义(P＞0.05).结论 脊髓星形胶质细胞分泌的EGF能够促进神经元细胞突起的生长,可作为FK506促进神经功能恢复的一个重要中介靶点.
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