【摘 要】
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目的克隆人野生型抑癌基因PTEN/MMAC1 cDNA序列、构建辐射诱导表达载体pEgr-hPTEN并研究其体外稳定转染联合X-射线照射对恶性胶质瘤细胞SHG-44增殖的抑制作用.方法利用RT-nested PCR法从正常人胎盘组织中扩增出约1 200 bp的PTEN片段,并将其重组入pcDNA3.1-Egr载体中,构建为表达质粒pEgr-hPTEN,体外转染肿瘤细胞并经G418筛选稳定转染细胞株
【机 构】
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130021,长春,吉林大学公共卫生学院卫生部放射生物学重点实验室,吉林大学第二医院,
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目的克隆人野生型抑癌基因PTEN/MMAC1 cDNA序列、构建辐射诱导表达载体pEgr-hPTEN并研究其体外稳定转染联合X-射线照射对恶性胶质瘤细胞SHG-44增殖的抑制作用.方法利用RT-nested PCR法从正常人胎盘组织中扩增出约1 200 bp的PTEN片段,并将其重组入pcDNA3.1-Egr载体中,构建为表达质粒pEgr-hPTEN,体外转染肿瘤细胞并经G418筛选稳定转染细胞株SHG-44-sPTEN,接受不同剂量X射线照射,观察基因-放射联合作用对肿瘤细胞生长的影响.结果经全自动测序证明克隆得到了野生型PTEN基因;辐射诱导表达载体pEgr-hPTEN构建正确;稳定转染联合X-射线照射可明显抑制肿瘤细胞的恶性增殖,5 Gy以内随吸收剂量的增加,肿瘤抑制作用更明显.结论本研究成功克隆了人野生型抑癌基因PTEN/MMAC1 cDNA序列并构建了辐射诱导表达载体pEgr-hPTEN,体外基因-放射联合治疗具有明显的肿瘤抑制作用.本研究为提高临床恶性肿瘤放疗疗效奠定了理论和实验基础.
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