【摘 要】
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本研究根据牛轮状病毒(Bovine rotavirus,BRV)的NSP4基因序列,设计并构建了shRNA重组慢病毒载体RNAi-H1-89,利用脂质体介导法,将RNAi-H1-89与辅助质粒共转染293细胞,包装shRN
【机 构】
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东北农业大学生命科学学院; 山东省农业科学院奶牛研究中心;
【基金项目】
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现代农业产业(奶牛)技术体系岗位科学家(nycytx-0107);国家转基因重大专项(2009ZX08007-006B);山东省自然科学基金(Y2008D20),山东省自然基金(ZR2009DQ016);山东农科院重大成果培育基金(2006YCG012);山东省农业重大应用技术创新课题(何洪彬);山东省科技攻关课题(2009GG20002032)
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本研究根据牛轮状病毒(Bovine rotavirus,BRV)的NSP4基因序列,设计并构建了shRNA重组慢病毒载体RNAi-H1-89,利用脂质体介导法,将RNAi-H1-89与辅助质粒共转染293细胞,包装shRNA重组慢病毒;重组慢病毒感染MA104细胞24h后继续接种BRV,以针对LacZ基因的shRNA重组慢病毒为对照,48h后与LacZshR-NA对照比较,RNAi-H1-89明显抑制MA104细胞病变;RT-PCR检测结果表明,针对NSP4基因的shRNA可特异性抑制牛轮状病毒NSP4基因表达;病毒滴度测定表明,在转染50%、75%、95%RNAi-H1-89质粒的细胞培养上清液中,病毒滴度分别是对照组的50%、20%和10%。上述实验结果表明,针对NSP4基因的shRNA能高效地沉默NSP4基因,并且能阻断牛轮状病毒增殖。
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