目的探讨MCF-7细胞、BT474细胞和MDA-MB-231细胞微球体形成的影响因素,并检测其CD44+CD24-/low的表达比例,明确富集干细胞的方法,以获得稳定数量的干细胞。方法将MCF-7、BT474和MDA-MB-231乳腺癌细胞进行微球体培养,取培养第7天的微球体细胞分别进行干细胞表型的FCM检测分析,判断干细胞富集的程度。结果 MCF-7、BT474和MDA-MB-231细胞形成微球体的效率分别为(2.40±0.20)%、(1.60±0.10)%和(0.60±0.05)%。在通常的干细胞培养液中MDA-MB-231细胞很难聚团生长。但是如果去除胰岛素,MDA-MB-231细胞则聚团生长。单层培养细胞中MCF-7、BT474和MDA-MB-231的CD44+CD24-/low的比例为(1.00±0.20)%、(0.30±0.05)%和(37.00±1.80)%,微球体细胞中CD44+CD24-/low的比例分别为(8.10±0.40)%、(0.60±0.20)%和(93.80±2.10)%,乳腺癌细胞中表达CD44+CD24-/low细胞表型的比例明显低于同种细胞培养的微球体(P<0.01)。结论通过微球体培养,富集了肿瘤干细胞,但是不同乳腺癌细胞来源的微球体中干细胞所占的比例差异很大,MDA-MB-231细胞最高。