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[摘要]目的 比较生熟五味子对复方化学成分的影响，为五味子“生熟异用”临床合理用药提供实验依据。 方法 采用HPLC法，测定小青龙汤中（含生五味子或酒五味子）五味子醇甲、芍药苷的含量。 结果 小青龙汤（含生五味子）中五味子醇甲、芍药苷的含量分别为0.0524%、0.0152% ，小青龙汤（含酒五味子），五味子醇甲、芍药苷的含量分别为0.0502%、0.0146% 。 结论 从化学成分角度能够验证五味子“入嗽药生用”的传统理论。
[关键词]五味子；炮制；小青龙汤；化学成分
[中图分类号] R289 [文献标识码] A [文章编号] 2095-0616（2015）11-35-03
[Abstract] Objective To provide scientific basis for the research and the clinical applications of "the processed Schisandra chinensis Fruits is different from the raw ones" through comparing the difference about chemical compounds in Xiaoqinglong decoction（contains raw Schisandra chinensis）and Xiaoqinglong decoction （contains processed Schisandra chinensis）. Methods To determine schisandrin and paeoniflorin in Xiaoqinglong decoction（contains raw Schisandra chinensis or wine processed Schisandra chinensis） by HPLC. Results The contents of schisandrin and paeoniflorin in Xiaoqinglong decoction which contain raw Schisandra chinensis were0.0524% and 0.0152%； the contents of schisandrin and paeoniflorin in Xiaoqinglong decoction which contain wine Schisandra chinensis were 0.0502% and 0.0146%. Conclusion Verified the traditional theory "raw Schisandra chinensis should be used in cough" from the chemical compounds of view.
[Key words] Schisandra chinensis； Processed； Xiaoqinglong decoction；Chemical compounds
五味子为木兰科植物五味子（Schisandra chinensis （Turcz.）Baill.）的干燥成熟果实，主产于辽宁、吉林、黑龙江、河北等地，习称“北五味子”，五味子酸、甘，温，归肺、心、肾经，收敛固涩，益气生津，补肾宁心[1]。传统理论认为五味子“入补药熟用，入嗽药生用”[2]，即五味子“生熟异用”。五味子常见的炮制品种有醋五味子、酒五味子，五味子醋制后能够增强酸涩收敛之性，酒制后能够增强益肾固精的作用[3]。关于五味子炮制的研究，见有炮制工艺、化学成分、药效学等方面的报道[4-8]。本课题组紧紧围绕五味子“生熟异用”，开展五味子生熟对比研究[9-10]，从药效学角度验证了五味子“入补药熟用，入嗽药生用”的传统理论，并将生熟五味子分别纳入复方小青龙汤，比较了小青龙汤中用生五味子或熟五味子抗过敏性哮喘作用的差异[11]。因生熟五味子在复方中表现出药理作用上的差异，推测其化学成分也一定存在差异，所以本文在前期研究基础上，选取小青龙汤指标性成分芍药苷、五味子指标性成分五味子醇甲，采用高效液相色谱法分析指标性成分的含量，为药理作用的改变寻找依据。
1 仪器与试药
1.1 仪器
日本岛津LC-10AP液相色谱仪。医用超声清洗器（昆山超声仪器有限公司），电子天平（Mettler Toledo AG285）。
1.2 试药
芍药苷对照品（批号：110736-201438）、五味子醇甲对照品（批号：110857-200709）购自中国药品生物制品检定所。水为纯水，乙腈为色谱纯。
五味子，购自辽宁丹东大梨树五味子GAP基地；麻黄、芍药、细辛、干姜、炙甘草、桂枝、法半夏均购自开发区保健大药房，均自行对照2010版《中国药典》鉴定。
2 实验方法
2.1 色谱条件
色谱柱ECOSIL120-5-C18柱（250 mm×4.6 mm， 5 μm）；流动相为甲醇：水（1%异丙醇1%HAC），梯度洗脱条件及检测波长见表1；流速1.0mL/min；柱温为室温，色谱图见图1。
2.2 对照品溶液的制备
精密称取五味子醇甲、芍药苷对照品，用甲醇溶解，制成混合对照品溶液，浓度分别为0.586mg/mL、0.142mg/mL。
2.3 供试品溶液的制备
取麻黄15g，芍药15g，细辛5g，生五味子（或酒五味子）10g，干姜10g，炙甘草10g，法半夏15g、桂枝15g加入800mL水，煎煮3次，过滤，浓缩至100mL，精密吸取25mL滤液置蒸发皿中，水浴蒸干后加入甲醇超声30min（功率250W，频率20kHz），过滤，滤液转移至25mL量瓶，加甲醇至刻度，摇匀，过0.45μm微孔滤膜，即得。 2.4 方法学考察
2.4.1 标准曲线制备 精密称取五味子醇甲5mg、芍药苷1mg，置100mL量瓶中甲醇稀释至刻度，摇匀，精密吸取对照品溶液0.25，0.5，0.75，1，2，3mL分别置10mL量瓶中，甲醇稀释至刻度，摇匀，进样10?L，测定。以进样量为横坐标（X），峰面积为纵坐标（Y）绘制标曲，五味子醇甲Y=2.73×106X-4.01×103，线性范围1.25～150?g/mL，r=0.9999，芍药苷Y=2.46×106X-2.25×103，线性范围0.25～30?g/mL，r=0.9999。
2.4.2 精密度试验 精密吸取对照品溶液连续进样5次，依次测定，五味子醇甲、芍药苷峰面积的RSD为0.24%、0.17%。
2.4.3 重复性实验 按“2.3 供试品溶液的制备”的方法，制备6份供试品，按照测定方法测定、计算五味子醇甲、芍药苷含量，五味子醇甲、芍药苷含量的RSD分别为0.90%、0.18%，表明本方法重复性良好。
2.4.4 稳定性试验 取供试品溶液，分别在0、1、2、4、6、8h进样，测定五味子醇甲与芍药苷的峰面积，其峰面积的RSD为0.28%、0.51%，表明供试品在8h内稳定性良好。
2.4.5 加样回收率试验 取已知含量的样品6份，精密加入对照品，按“2.3”项下操作，制备成供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件进行分析，结果见表2 ～ 表3。
2.5 样品含量测定
取各样品，按“2.3”项下操作，制备成供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件进行分析，记录峰面积，计算样品中各成分含量，结果见表4。
3 讨论
复方是中药临床应用的主要形式，方剂是中医临床用药的一大特点，中药通过配伍组方可起到增效、减毒、缓和药性或产生新药效等作用，所以将中药炮制纳入复方进行研究很有意义[12]。
因对生熟五味子在复方中药效学研究发现，小青龙汤中分别用生五味子或制五味子，表现出药理作用上的差异，含有生五味子的小青龙汤对鸡卵白蛋白致敏的哮喘小鼠治疗作用优于含有制五味子的小青龙汤[11]。本实验通过化学成分研究表明，含生五味子的小青龙汤中的五味子醇甲、芍药苷含量都略高于含有酒五味子的小青龙汤。说明五味子炮制后入复方利于五味子醇甲成分的增加，同时能够利于煎煮过程中酒五味子与其他药物相互作用，促进了有效成分（如芍药苷）的溶出。小青龙汤中以芍药酸寒五味酸温而收之，五味子醇甲、芍药苷分别是药典规定的五味子、小青龙汤的指标性成分，其含量的增加能够从化学成分角度进一步验证五味子“入嗽药生用”的传统理论。
[参考文献]
[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[S].北京：中国医药科技出版社，2010： 61-62.
[2] 张浩.仁术便览[M].海口：海南国际新闻出版社，1995：320.
[3] 贾天柱.中药炮制学[M].上海：上海科学技术出版社，2010：266.
[4] 陆兔林，毛春芹，吕高虹，等.五味子不同炮制品补益作用的实验研究[J].中国药学杂志，2009，44（15）：1147-1149.
[5] 姚庆，陆兔林，胡芳，等.五味子不同炮制品对小鼠CYP450的诱导作用[J].华西药学杂志，2011，26（3）：249-251.
[6] 陆兔林，殷放宙，毛春芹，等.酒蒸五味子炮制工艺研究[J].中成药，2007，29（4）：543-544.
[7] 周艳，祁英杰，闫小玉，等.北五味子及其不同炮制品中的6种木脂素类成分的含量测定[J].中国中药杂志，2011，36（24）：211-213.
[8] 葛会奇.五味子炮制工艺规范化及原理研究[D].沈阳：辽宁中医药大学，2007：36-40.
[9] 高慧，佟鑫，裴启洋，等.五味子“生熟异用”之补肾阳作用[J].中草药，2014，45（13）：1889-1893.
[10] 高慧，佟鑫，裴启洋，等.五味子“生熟异用”之补肾阴作用[J].中成药，2014，36（12）：2471-2474.
[11] 佟鑫.五味子入补药熟用，入嗽药生用对比研究[D].沈阳：辽宁中医药大学，2014：31-33.
[12] 蔡宝昌，龚千锋.中药炮制专论[M].北京：人民卫生出版社，2009：13.
（收稿日期：2015-03-20）
[关键词]五味子；炮制；小青龙汤；化学成分
[中图分类号] R289 [文献标识码] A [文章编号] 2095-0616（2015）11-35-03
[Abstract] Objective To provide scientific basis for the research and the clinical applications of "the processed Schisandra chinensis Fruits is different from the raw ones" through comparing the difference about chemical compounds in Xiaoqinglong decoction（contains raw Schisandra chinensis）and Xiaoqinglong decoction （contains processed Schisandra chinensis）. Methods To determine schisandrin and paeoniflorin in Xiaoqinglong decoction（contains raw Schisandra chinensis or wine processed Schisandra chinensis） by HPLC. Results The contents of schisandrin and paeoniflorin in Xiaoqinglong decoction which contain raw Schisandra chinensis were0.0524% and 0.0152%； the contents of schisandrin and paeoniflorin in Xiaoqinglong decoction which contain wine Schisandra chinensis were 0.0502% and 0.0146%. Conclusion Verified the traditional theory "raw Schisandra chinensis should be used in cough" from the chemical compounds of view.
[Key words] Schisandra chinensis； Processed； Xiaoqinglong decoction；Chemical compounds
五味子为木兰科植物五味子（Schisandra chinensis （Turcz.）Baill.）的干燥成熟果实，主产于辽宁、吉林、黑龙江、河北等地，习称“北五味子”，五味子酸、甘，温，归肺、心、肾经，收敛固涩，益气生津，补肾宁心[1]。传统理论认为五味子“入补药熟用，入嗽药生用”[2]，即五味子“生熟异用”。五味子常见的炮制品种有醋五味子、酒五味子，五味子醋制后能够增强酸涩收敛之性，酒制后能够增强益肾固精的作用[3]。关于五味子炮制的研究，见有炮制工艺、化学成分、药效学等方面的报道[4-8]。本课题组紧紧围绕五味子“生熟异用”，开展五味子生熟对比研究[9-10]，从药效学角度验证了五味子“入补药熟用，入嗽药生用”的传统理论，并将生熟五味子分别纳入复方小青龙汤，比较了小青龙汤中用生五味子或熟五味子抗过敏性哮喘作用的差异[11]。因生熟五味子在复方中表现出药理作用上的差异，推测其化学成分也一定存在差异，所以本文在前期研究基础上，选取小青龙汤指标性成分芍药苷、五味子指标性成分五味子醇甲，采用高效液相色谱法分析指标性成分的含量，为药理作用的改变寻找依据。
1 仪器与试药
1.1 仪器
日本岛津LC-10AP液相色谱仪。医用超声清洗器（昆山超声仪器有限公司），电子天平（Mettler Toledo AG285）。
1.2 试药
芍药苷对照品（批号：110736-201438）、五味子醇甲对照品（批号：110857-200709）购自中国药品生物制品检定所。水为纯水，乙腈为色谱纯。
五味子，购自辽宁丹东大梨树五味子GAP基地；麻黄、芍药、细辛、干姜、炙甘草、桂枝、法半夏均购自开发区保健大药房，均自行对照2010版《中国药典》鉴定。
2 实验方法
2.1 色谱条件
色谱柱ECOSIL120-5-C18柱（250 mm×4.6 mm， 5 μm）；流动相为甲醇：水（1%异丙醇1%HAC），梯度洗脱条件及检测波长见表1；流速1.0mL/min；柱温为室温，色谱图见图1。
2.2 对照品溶液的制备
精密称取五味子醇甲、芍药苷对照品，用甲醇溶解，制成混合对照品溶液，浓度分别为0.586mg/mL、0.142mg/mL。
2.3 供试品溶液的制备
取麻黄15g，芍药15g，细辛5g，生五味子（或酒五味子）10g，干姜10g，炙甘草10g，法半夏15g、桂枝15g加入800mL水，煎煮3次，过滤，浓缩至100mL，精密吸取25mL滤液置蒸发皿中，水浴蒸干后加入甲醇超声30min（功率250W，频率20kHz），过滤，滤液转移至25mL量瓶，加甲醇至刻度，摇匀，过0.45μm微孔滤膜，即得。 2.4 方法学考察
2.4.1 标准曲线制备 精密称取五味子醇甲5mg、芍药苷1mg，置100mL量瓶中甲醇稀释至刻度，摇匀，精密吸取对照品溶液0.25，0.5，0.75，1，2，3mL分别置10mL量瓶中，甲醇稀释至刻度，摇匀，进样10?L，测定。以进样量为横坐标（X），峰面积为纵坐标（Y）绘制标曲，五味子醇甲Y=2.73×106X-4.01×103，线性范围1.25～150?g/mL，r=0.9999，芍药苷Y=2.46×106X-2.25×103，线性范围0.25～30?g/mL，r=0.9999。
2.4.2 精密度试验 精密吸取对照品溶液连续进样5次，依次测定，五味子醇甲、芍药苷峰面积的RSD为0.24%、0.17%。
2.4.3 重复性实验 按“2.3 供试品溶液的制备”的方法，制备6份供试品，按照测定方法测定、计算五味子醇甲、芍药苷含量，五味子醇甲、芍药苷含量的RSD分别为0.90%、0.18%，表明本方法重复性良好。
2.4.4 稳定性试验 取供试品溶液，分别在0、1、2、4、6、8h进样，测定五味子醇甲与芍药苷的峰面积，其峰面积的RSD为0.28%、0.51%，表明供试品在8h内稳定性良好。
2.4.5 加样回收率试验 取已知含量的样品6份，精密加入对照品，按“2.3”项下操作，制备成供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件进行分析，结果见表2 ～ 表3。
2.5 样品含量测定
取各样品，按“2.3”项下操作，制备成供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件进行分析，记录峰面积，计算样品中各成分含量，结果见表4。
3 讨论
复方是中药临床应用的主要形式，方剂是中医临床用药的一大特点，中药通过配伍组方可起到增效、减毒、缓和药性或产生新药效等作用，所以将中药炮制纳入复方进行研究很有意义[12]。
因对生熟五味子在复方中药效学研究发现，小青龙汤中分别用生五味子或制五味子，表现出药理作用上的差异，含有生五味子的小青龙汤对鸡卵白蛋白致敏的哮喘小鼠治疗作用优于含有制五味子的小青龙汤[11]。本实验通过化学成分研究表明，含生五味子的小青龙汤中的五味子醇甲、芍药苷含量都略高于含有酒五味子的小青龙汤。说明五味子炮制后入复方利于五味子醇甲成分的增加，同时能够利于煎煮过程中酒五味子与其他药物相互作用，促进了有效成分（如芍药苷）的溶出。小青龙汤中以芍药酸寒五味酸温而收之，五味子醇甲、芍药苷分别是药典规定的五味子、小青龙汤的指标性成分，其含量的增加能够从化学成分角度进一步验证五味子“入嗽药生用”的传统理论。
[参考文献]
[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[S].北京：中国医药科技出版社，2010： 61-62.
[2] 张浩.仁术便览[M].海口：海南国际新闻出版社，1995：320.
[3] 贾天柱.中药炮制学[M].上海：上海科学技术出版社，2010：266.
[4] 陆兔林，毛春芹，吕高虹，等.五味子不同炮制品补益作用的实验研究[J].中国药学杂志，2009，44（15）：1147-1149.
[5] 姚庆，陆兔林，胡芳，等.五味子不同炮制品对小鼠CYP450的诱导作用[J].华西药学杂志，2011，26（3）：249-251.
[6] 陆兔林，殷放宙，毛春芹，等.酒蒸五味子炮制工艺研究[J].中成药，2007，29（4）：543-544.
[7] 周艳，祁英杰，闫小玉，等.北五味子及其不同炮制品中的6种木脂素类成分的含量测定[J].中国中药杂志，2011，36（24）：211-213.
[8] 葛会奇.五味子炮制工艺规范化及原理研究[D].沈阳：辽宁中医药大学，2007：36-40.
[9] 高慧，佟鑫，裴启洋，等.五味子“生熟异用”之补肾阳作用[J].中草药，2014，45（13）：1889-1893.
[10] 高慧，佟鑫，裴启洋，等.五味子“生熟异用”之补肾阴作用[J].中成药，2014，36（12）：2471-2474.
[11] 佟鑫.五味子入补药熟用，入嗽药生用对比研究[D].沈阳：辽宁中医药大学，2014：31-33.
[12] 蔡宝昌，龚千锋.中药炮制专论[M].北京：人民卫生出版社，2009：13.
（收稿日期：2015-03-20）