【摘要】本文通过建立数学模型和对不确定度的来源进行分析，对HPLC法测定生脉注射液中人参皂苷Rg₁和人参皂苷Re含量测定结果的不确定度分步评定，再合成标准不确定度，最后用扩展不确定度（置信概率为95％）来对实验结果的不确定度进行表述。
　　【关键词】不确定度的合成;标准不确定度;扩展不确定度
　　【中图分类号】R284.1【文献标识码】A【文章编号】1005-1074(2009)03-0005-02
　　
　　1测量方法概述
　　
　　1.1测量对象HPLC法测定生脉注射液中人参皂苷Rg₁和人参皂苷Re含量的不确定度分析。
　　1.2应用标准国家食品药品监督管理局标准YBZ11212004。
　　1.3实验方法精密量取供试品10ml，浓缩至近干，用流动相稀释至2ml。取五氧化二磷干燥至恒重的人参皂苷Rg₁和人参皂苷Re，人参皂苷Rg₁约10mg，精密称定，用流动相溶解并定容至15ml；人参皂苷Re约10mg，精密称定，用流动相溶解并定容至20ml；分别量取上述两种溶液各10ml，定容至20ml。分别进样20μ1，记录色谱图，按外标法计算。
　　1.4主要仪器和试剂Waters高效液相色谱仪（HPLC060302D）；电子天平（Sortorius BS21S，DZTP 17）：精度0.01mg；10ml量瓶（A级）、15ml量瓶（A级）、20ml量瓶（A级）；10ml移液管（A级）。2ml量瓶（A级）。对照品由中检所提供:人参皂苷Rg₁（批号110703－200424，含量测定用），人参皂苷Re（批号110754－200320，含量测定用）水为去离子水，其他试剂均为分析纯。
　　1.5环境条件室内温度：20℃±3℃，每小时波动≤2℃；室内相对湿度：42％±5％；供电电源：220±20V，50Hz；因此，由环境变化引起的不确定度可以忽略不计。
　　1.6引用文件及参考文献①中国实验室国家认可委员会.化学分析中不确定度的评估指南.北京：中国计量出版社；②国家技术监督局.中华人民共和国国家计量检定规程、常用玻璃量器.中国标准出版社；③国家质量技术监督局.测量不确定度评定与表示.北京:中国计量出版社。
　　
　　2不确定度评估
　　
　　2.1数学模型
　　式中X:注射液中的人参皂苷Rg₁或人参皂苷Re含量
　　As:样品中人参皂苷Rg₁或人参皂苷Re色谱峰的峰面积
　　Vs:供试品取样量(ml)
　　Vs1:样品定容体积(ml)f-:高效液相色谱法校正因子，f-＝1n∑ni=1CAi
　　其中C＝mVR1×VR2VR3
　　m:对照品的称样量 （mg）
　　VR1: 对照品初次定容体积（ml）
　　VR2:稀释时移液管取样体积（ml）
　　VR3:对照品最后定容体积（ml）
　　Ai:对照品液中人参皂苷Rg₁或人参皂苷Re色谱峰的峰面积
　　2.2不确定度的来源分析①测量的重复性（对照品包含在校正因子里，可用变异系数表示，供试品部分包含在平行样品的计算结果中，同样可用变异系数表示）；②取样；体积（稀释转移和定容引入）。
　　2.3各分量的标准不确定度
　　2.3.1校正因子f-的标准不确定度u(f-)的评定输入量f-的标准不确定度来源于称样误差，稀释定容体积的误差，色谱峰测量的不确定性等，这些误差引起的不确定度分述如下：
　　①对照品（人参皂苷Rg₁或人参皂苷Re）浓度的不确定度：见表1和表2。质量部分的不确定度由称样引入，U(m)由天平引入，天平的精度U=0.01mg，取包含因子k＝3（置信度99％），对照品称量约为10mg，称样的相对不确定度分别是：U(m)＝0.01/(10k)= 3.33×10-4；
　　对照品液由对照品稀释而成，移液管和量瓶引入的不确定度应计算在内，根据国家计量检定规程规定，A级15ml的量瓶允许误差±0.02ml，A级20ml的量瓶允许误差±0.02ml，A级10 ml移液管允许误差±0.02ml，按矩形分布，取包含因子k＝3，对照品稀释定容的相对不确定度：人参皂苷Rg₁：U(VR1)
　　=(0.0215×3)2+(0.0210×3)2+(0.0220×3)2＝1.50×10－3
　　人参皂苷Re：U(VR2)
　　＝ (0.0220×3)2+(0.0210×3)2+(0.0220×3)2＝1.41×10－3。
　　对照品（人参皂苷Rg₁或人参皂苷Re）浓度的相对不确定度:
　　u(C)=U2(m)+U2(VR1)(或U2(VR2))
　　人参皂苷Rg₁：u1(C)
　　＝(3.33×10-4)2+(1.50×10-3)2＝1.54×10－3
　　人参皂苷Re：u1(C)
　　＝(3.33×10-4)2+(1.41×10-3)2＝1.45×10－3
　　②对照品色谱峰不确定度确定u(Ai):u(Ai)的不确定度主要由重复进样引起的，由仪器给出进样峰面积标准偏差是随机测量，属A类不确定度（在这里可以用校正因子的变异系数表示）。
　　2.3.2供试品含量测定的不确定度评定①供试品浓度的不确定度u(C1):u(C1)由供试品取样和稀释定容引起。其中取样是用10ml移液管（A级）（允许误差±0.02ml），定容在2ml量瓶（A级）（允许误差±0.015ml），按矩形分布，取包含因子k＝ 3， u(C1)＝(0.0210×3)2+(0.0152×3)2＝0.00448
　　②供试品测定的结果的不确定度u(A):含量测定一般采取平行测试两份样品，每份样品进样2次，所得峰面积分别为：人参皂苷Rg₁3432752、3482578、3491122、3425108；人参皂苷Re2609003、2613329、2492405、2455262。可采用四个峰面积的变异系数来表示u(A)，人参皂苷Rg₁u1(A)＝0.00976；人参皂苷Reu2(A)＝0.0318
　　含量测定计算的结果:每ml含人参皂苷Rg₁：0.12mg；人参皂苷Re：0.10mg
　　2.3.3合成不确定度①测定的合成相对不确定度UCR(X)=u2(f-)+u2(C1)+U人参皂苷Rg₁ UCR(X) 1=(0.00929)2+(0.00448)2+(0.00976)2=0.0142人参皂苷Re UCR(X) 2=(0.0154)2+(0.00448)2+(0.0318)2=0.0356
　　②合成标准不确定度:人参皂苷Rg₁ ：UC(X)1=0.12×0.0142＝0.0017mg;人参皂苷Re：UC(X)1=0.10×0.0356＝0.00356mg
　　2.3.4扩展不确定度实验结果一般用扩展不确定度表示。取包含因子k＝2（置信概率约95％），含量测定扩展不确定度为：人参皂苷Rg₁ Ur(X)1＝2×0.0017＝0.0034mg，测定的结果可表示为每ml含人参皂苷Rg₁ 0.12mg±0.0034mg；人参皂苷Re含量测定扩展不确定度为：Ur(X)2＝2×0.00356＝0.0071mg，测定的结果可表示为每ml含人参皂苷Re0.10mg±0.0071mg。
　　(收稿日期：2009.03.16)