探讨细胞色素氧化酶亚基Ⅰ基因(COⅠ)、细胞色素b基因(Cyt b)及16S rRNA基因对主要渔获区的蓝鳍金枪鱼(Thunnus thynnus)、马苏金枪鱼(Thunnus maccoyii)、黄鳍金枪鱼(Thunnus albacares)、大目金枪鱼(Thunnus obesus)、长鳍金枪鱼(Thunnus alalunga)和正鲣(Katsuwonus pelamis) 6种重要的生食金枪鱼及其易混品种的物种鉴定和进化分析的适用性。采用3对通用引物对6种金枪鱼共63个样品的COⅠ、Cyt b和16S rRNA 3种序列片段进行PCR扩增、测序，并运用DnaSP 5.10、Mega 7.0等软件进行了DNA序列分析、遗传差异分析和进化树分析。结果显示，16S rRNA较为保守，不能很好区分6种金枪鱼，且不能对同一物种不同地理群体进行聚类分析；Cyt b和COⅠ配合使用能很好区分6种金枪鱼，且存在一定同一物种地理群体聚类的趋势。建议COⅠ与Cyt b基因基因一起用于上述6种金枪鱼的分子鉴别研究。本研究为进生食金枪鱼及其制品的物种鉴定及金枪鱼产业的健康发展提供了技术支撑。