目的 应用腺病毒改良载体系统构建的携带ANGPTL4和siANGPTL4基因的重组腺病毒,通过体内外实验研究ANGPTL4基因对骨肉瘤细胞株143B增殖和迁移能力的影响.方法 应用腺病毒AdEasy系统,采用同源重组法构建携带ANGPTL4和siANGPTL4基因片段的重组腺病毒Ad-ANGPTL4和Ad-siANGPTL4,有限稀释法检测病毒滴度；重组腺病毒转染143B细胞,RT-PCR检测重组腺病毒体外转染的作用,结晶紫染色法、细胞计数、划痕实验观测ANGPTL4基因对143B细胞体外增殖和迁移能力的影响；采用胫骨肿瘤细胞注射法建立裸鼠143B骨肉瘤动物模型,Xenogen生物发光成像系统动态监测骨肉瘤原位生长情况.结果 成功构建携带ANGPTL4和siANGPTL4基因的重组腺病毒Ad-ANGPTL4和Ad-siANGPTL4,病毒滴度达1.2×1011～2.6×1011 pfu/ml；根据加入的重组腺病毒携带的基因不同将实验细胞分为阴性对照组、RFP组、ANGPTL4组及siANGPTL4组,各组细胞ANGPTL4基因表达的相对强度分别为157.39±9.87、156.90±8.95、185.29±8.24、129.28±7.28,ANGPTL4组和siANGPTL4组中基因相对表达强度显著增加或降低(P＜0.05).结晶紫染色、细胞计数及划痕实验显示,ANGPTL4基因过度表达可促进143B细胞增殖和迁移；该基因抑制后143B细胞增殖和迁移明显减缓(P＜0.05).成功建立裸鼠143B骨肉瘤动物模型,成瘤率达100％；Xenogen生物发光成像系统动态监测发现ANGPTL4基因过度表达可促进骨肉瘤的生长；该基因抑制后肿瘤生长明显减缓(P＜0.05).结论 成功构建了Ad-AN-GPTL4和Ad-siANGPTL4重组腺病毒并感染143B细胞使其内源性表达的ANGPTL4基因增加或沉默；该基因的表达增强或沉默能促进或抑制骨肉瘤143B细胞在体内外的增殖和迁移。
血管生成素样蛋白4基因对骨肉瘤增殖及迁移作用的影响
【摘 要】
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目的 应用腺病毒改良载体系统构建的携带ANGPTL4和siANGPTL4基因的重组腺病毒,通过体内外实验研究ANGPTL4基因对骨肉瘤细胞株143B增殖和迁移能力的影响.方法 应用腺病毒AdEasy系统,采用同源重组法构建携带ANGPTL4和siANGPTL4基因片段的重组腺病毒Ad-ANGPTL4和Ad-siANGPTL4,有限稀释法检测病毒滴度；重组腺病毒转染143B细胞,RT-PCR检测重组
【机 构】
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400014重庆医科大学儿科学院,儿童发育疾病研究省部共建教育部重点实验室,儿科学重庆市重点实验室,重庆市儿童发育重大疾病诊治与预防国际科技合作基地,400014重庆医科大学儿科学院,儿童发育疾病研究
【出 处】
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中华小儿外科杂志
【发表日期】
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2014年35期
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