【摘 要】
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目的 构建人8-羟基鸟嘌呤-DNA糖苷酶(hOGG1)基因高表达细胞株,并初步探讨该细胞株对DNA氧化损伤与修复作用的影响.方法 提取人血液淋巴细胞总RNA,设计hOGG1特异性引物,RT-PCR
【机 构】
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重庆,重庆医科大学附属儿童医院PICU,重庆医科大学附属第一医院肿瘤科,Department of Radiation Oncology & Image-applied Therapy Kyoto U
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目的 构建人8-羟基鸟嘌呤-DNA糖苷酶(hOGG1)基因高表达细胞株,并初步探讨该细胞株对DNA氧化损伤与修复作用的影响.方法 提取人血液淋巴细胞总RNA,设计hOGG1特异性引物,RT-PCR扩增后构建pcDNA3.1(+)/Myc-His A/hOGG1载体.经EcoRI和KpnI酶切,凝胶电泳及DNA测序证实建立成功后,稳定转染A549细胞,Western blot法检测转染阳性细胞hOGG1蛋白表达的改变.以构建的hOGG1基因高表达细胞株为研究对象,H2O2为受试物,彗星试验检测比较各组细胞对抗损伤和修复能力的情况.结果 成功构建pcDNA3.1(+)/Myc-His A/hOGG1质粒并转染目的 细胞,Western blot法检测转染靶细胞中hOGG1蛋白表达比空白组和阴性对照组明显增加(P
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