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【摘要】 目的建立绵阳市健康成人CD3、CD4、CD8计数及CD4/ CD8比值正常值参考范围。方法：选取152例正成年常年人不同年龄组的血标本，用德国PartecPAS流式细胞仪进行CD3CD4CD8计数，得出不同性别及不同年龄组的CD3、CD4、CD8、CD4/ CD8比值，并进行分析。结果: CD4绝对值在不同年龄及不同性别之间无显著性差异，其正常均值CD3为3063±385、CD4为650±211、CD8为460±200。结论：绵阳地区CD4计数与对于指导绵阳市的艾滋病诊断及治疗工作有重要意义。
【关键词】 流式细胞仪；CD3CD4CD8淋巴细胞；艾滋病
The investigation of normal value for lymphocyte count of CD3、CD4、CD8T and CD4/CD8 among healthy adults in Mianyang
Yang hongChen-GuoJiang Zhi-HuiZhou Liang-JunJia Shu-GuangYao WeiXiang Xuan-XuanXu Jia-QingYao NanLiu Jun-ling
【Abstract】 Objective: To establish normal value of CD3、CD4、CD8 count and CD4/ CD8 healthy adults in Mianyang. Methods: Tesing 152 blood samples from adult people in different age groups, with Germany Partec PAS flow cytometric for CD3CD4CD8 count. Got the value of CD3、CD4、CD8、the ratio of CD4/ CD8 from different gender and different age groups. Results The absolute value between different age and gen was no significant difference. The normal value of CD3 was 3063±385, CD4 for 650±211, CD8 for 460±200. Conclusion:It is very important thaht the count of CD4 for guiding the diagnosis and treatment for AIDS in Mianyang.
【Keywords】 flow cytometric; CD3CD4CD8 lymphatic cells; AIDS
目前我国正处于艾滋病流行的快速增长期，许多感染者已进入发病阶段。我市从2007年开展艾滋病确认试验以来已确认绵阳市本地的HIV感染者或AIDS病人546人，AIDS病人逐渐增多，预防、诊断和治疗AIDS成为重要的工作。在AIDS治疗和药效评估工作中，首先要建立AIDS临床治疗的各种免疫指标及实验室的参考范围[1]
CD4T淋巴细胞是免疫反应和免疫调节的中心细胞，是HIV感染的主要靶细胞，人体感染了HIV后，主要的病理过程就是免疫系统的损害，主要表现为CD4T淋巴细胞的丢失，绝对数量的减少，CD8T淋巴细胞相对增加，CD4和CD8T细胞的比值倒置，所以CD4T细胞计数是判断HIV感染者或艾滋病患者AIDS病情严重程度的指标，预测愈后及抗病毒治疗的效果。当前，用流式细胞仪来检查免疫细胞的分型较为普遍，许多国家的实验室建立了自己的正常值范围。而不同的国家或地区的种族、生态环境和经济状况等因素，可能影响各个地区人群免疫系统的差异[2]。我中心艾滋病实验室通过对绵阳地区健康正常人(16-60)岁CD3、CD4、CD8T淋巴细胞正常值的调查，初步得到绵阳地区健康成年人的CD4、CD8、CD3T淋巴细胞正常值，供国家制定统一的正常值提供参考。
1材料和方法
1.1研究对象152名健康成人，年龄16-60岁，近期无传染病史，健康体检（包括HIV抗体、HCH抗体、HBsAg、肝功、梅毒血清学试验及血细胞计数），正常者。
分组方法（1）按性别：男性组76例，女性组76名；（2）按年龄：16-39岁组82例，40-60岁70例。
1.2样本采集 上午9时-12时采集被检测者全血3-4ml于K3EDTA抗凝真空管内，轻轻颠倒混匀室温下放置，12小时内检测。
1.3检测试剂及仪器室内质控品为贝克曼公司提供的，试剂德国Partec公司提供的CD3、CD4、CD8荧光抗体，检测仪器为PartecPAS流式细胞仪。
1.4 实验方法①平衡试剂：将试剂从2-8°C冰箱取出，室温平衡30分钟；将试管编号，分别加入CD3CD4CD8荧光抗体20ul，轻轻颠倒混匀全血(1分钟)，向已加入荧光抗体的试管加入20 ul全血，立即混匀；②孵育，避光孵育15分钟，加入800 ul溶血素；③上机检测，上机前混匀。
1.5统计方法 所有资料均输入计算机，使用SPSS10#软件进行t检验，非参数统计，方差分析，结果以X±表示，用百分数法计算95%和90%范围。
2 结果
152名健康成人健康体检结果，抗HIV、抗HCV 、HBsAg、梅毒TPPA均为阴性，肝功正常，血球計数仪进行了血常规检测，白细胞6.23±1.49，淋巴细胞百分比：35%±7.53%。
152名健康成人CD3CD4CD8细胞绝对计数和、CD4/ CD8比值见下表1；分别按年龄和性分组，测定CD3CD4CD8及CD4/ CD8比值，见表2所示，在年龄、性别分布上无显著的统计学意义（P>0.05）。
表1152名健康成人检测结果分析及参考范围（单位：个/ul）
3 讨论
3.1 T淋巴细胞在机体抗感染、抗肿瘤等方面具有十分重要的意义，尤其是CD4Th细胞，经活化巨噬细胞而诱生炎症，在清除细胞内病原感染中具有重要作用，而表达于活化的CD4T细胞表面的CD40L是B细胞表面CD40分子（B细胞的协同刺激受体）的配体，能促使B细胞充分活化、增殖分化为浆细胞合成抗体，所以T淋巴细胞是机体免疫系统内功能最重要的一群淋巴细胞，其主要由CD4和CD8两群细胞组成，T细胞的CD4分子是HIV的受体，HIV通常首先侵犯和破坏CD4T细胞，其数量和功能降低是HIV感染引起机体免疫功能缺陷的主要原因，外周血中CD4T淋巴细胞的数量对于确定HIV感染状况，是否进入AIDS期，预产期机会性感染的可能性和评价治疗效果具有极其重要的作用[3] [4]。CD8T细胞是获得细胞免疫力的重要效应细胞。在HIV感染者中，CD8T细胞在控制HIV复制中起重要作用[5]。CD4/CD8比值反映HIV 疾病状况，可作为评价病情发展程度的重要指标之一[6]。
3.2由于淋巴细胞免疫分型受生活环境、种族、地域等因素的影响，故不同的地区的参考值不同。上海地区采用双平台的方法检测的结果：健康成年人CD4T细胞计数平均值为726.99±255.21，CD8细胞计数平均值为539.58±134.07，CD4/CD8比值平均值为1.49±0.57，与之相比，绵阳T淋巴细胞亚群的分类均值比上海少76个/ul，无显著性差异；美国疾病预防控中心测定的成人CD4计数正常值为844±247个/ ul，CD8计数正常值为(539.58±134.07)并规定CD4绝对计数≤500个/ ul，作为AIDS诊断的依据之一，并可开始抗病毒治疗[7]，绵阳市的正常人T淋巴细胞计数与其相比CD4少194(P<0.05),在统计学上有显著性差异；而我国现在采用的抗病毒治疗选择时机均采用美国的标准，所以在进行抗病毒治疗时所需的CD4也应相应下降标准；同时通过比较可知，男女之间及不同年龄组间CD4比较，无显著性差异。
3.3综上所诉，绵阳地区健康成人CD4绝对计数均值较国外低，但比值相近，男女之间及年龄之间无显著性差异，可用统一的正常值范围，。由于实验室检测方法不同、人群不同、环境不同、样本量不同和样本收集时间不同等都可以导致检测结果不同[7] ，故各实验室都应建立自己本地区实验室的健康成人参考值范围，以利于指导本地区的抗病毒治疗方案的制定以及AIDS病人疗效的观察，为艾滋病的预防治疗提供科学的依据。
参考文献
[1]刘伟，陈杰。李志军，等.广西HIV感染流行分析[J] .广西预防医学，2001,10,7（5）：257-260 .
[2]刘帅凤，刘伟，陈杰，等.广西壮族自治区健康成年人T淋巴细胞亚群分类绝对计数及CD4/CD8比值调查[J] .中国艾滋病性病，2004，12,10（6）：413-415.
[4]Ehmann WC,Eyster SE,VilsonSE,et al. Relationship of CD4 lymphocyte counts to survival in a cohor of hemophiliacs infected with HIV. Multicenter Hemophilia Cohort Study[J].J Acquir Immune Defic Syndr,1994,July:1095-1098.
[5]蒋为民，潘孝彰，康来仪，等.上海地区健康成人不同年龄组间CD4、C48淋巴细胞计数正常值调查[J] .中华传染病杂志，2002.8:20（4）：203-205.
[8]约翰G，巴特利特，乔尔E，等.艾滋病病毒感染的诊断治疗[M] .北京：科学出版社，2002.32.
【关键词】 流式细胞仪；CD3CD4CD8淋巴细胞；艾滋病
The investigation of normal value for lymphocyte count of CD3、CD4、CD8T and CD4/CD8 among healthy adults in Mianyang
Yang hongChen-GuoJiang Zhi-HuiZhou Liang-JunJia Shu-GuangYao WeiXiang Xuan-XuanXu Jia-QingYao NanLiu Jun-ling
【Abstract】 Objective: To establish normal value of CD3、CD4、CD8 count and CD4/ CD8 healthy adults in Mianyang. Methods: Tesing 152 blood samples from adult people in different age groups, with Germany Partec PAS flow cytometric for CD3CD4CD8 count. Got the value of CD3、CD4、CD8、the ratio of CD4/ CD8 from different gender and different age groups. Results The absolute value between different age and gen was no significant difference. The normal value of CD3 was 3063±385, CD4 for 650±211, CD8 for 460±200. Conclusion:It is very important thaht the count of CD4 for guiding the diagnosis and treatment for AIDS in Mianyang.
【Keywords】 flow cytometric; CD3CD4CD8 lymphatic cells; AIDS
目前我国正处于艾滋病流行的快速增长期，许多感染者已进入发病阶段。我市从2007年开展艾滋病确认试验以来已确认绵阳市本地的HIV感染者或AIDS病人546人，AIDS病人逐渐增多，预防、诊断和治疗AIDS成为重要的工作。在AIDS治疗和药效评估工作中，首先要建立AIDS临床治疗的各种免疫指标及实验室的参考范围[1]
CD4T淋巴细胞是免疫反应和免疫调节的中心细胞，是HIV感染的主要靶细胞，人体感染了HIV后，主要的病理过程就是免疫系统的损害，主要表现为CD4T淋巴细胞的丢失，绝对数量的减少，CD8T淋巴细胞相对增加，CD4和CD8T细胞的比值倒置，所以CD4T细胞计数是判断HIV感染者或艾滋病患者AIDS病情严重程度的指标，预测愈后及抗病毒治疗的效果。当前，用流式细胞仪来检查免疫细胞的分型较为普遍，许多国家的实验室建立了自己的正常值范围。而不同的国家或地区的种族、生态环境和经济状况等因素，可能影响各个地区人群免疫系统的差异[2]。我中心艾滋病实验室通过对绵阳地区健康正常人(16-60)岁CD3、CD4、CD8T淋巴细胞正常值的调查，初步得到绵阳地区健康成年人的CD4、CD8、CD3T淋巴细胞正常值，供国家制定统一的正常值提供参考。
1材料和方法
1.1研究对象152名健康成人，年龄16-60岁，近期无传染病史，健康体检（包括HIV抗体、HCH抗体、HBsAg、肝功、梅毒血清学试验及血细胞计数），正常者。
分组方法（1）按性别：男性组76例，女性组76名；（2）按年龄：16-39岁组82例，40-60岁70例。
1.2样本采集 上午9时-12时采集被检测者全血3-4ml于K3EDTA抗凝真空管内，轻轻颠倒混匀室温下放置，12小时内检测。
1.3检测试剂及仪器室内质控品为贝克曼公司提供的，试剂德国Partec公司提供的CD3、CD4、CD8荧光抗体，检测仪器为PartecPAS流式细胞仪。
1.4 实验方法①平衡试剂：将试剂从2-8°C冰箱取出，室温平衡30分钟；将试管编号，分别加入CD3CD4CD8荧光抗体20ul，轻轻颠倒混匀全血(1分钟)，向已加入荧光抗体的试管加入20 ul全血，立即混匀；②孵育，避光孵育15分钟，加入800 ul溶血素；③上机检测，上机前混匀。
1.5统计方法 所有资料均输入计算机，使用SPSS10#软件进行t检验，非参数统计，方差分析，结果以X±表示，用百分数法计算95%和90%范围。
2 结果
152名健康成人健康体检结果，抗HIV、抗HCV 、HBsAg、梅毒TPPA均为阴性，肝功正常，血球計数仪进行了血常规检测，白细胞6.23±1.49，淋巴细胞百分比：35%±7.53%。
152名健康成人CD3CD4CD8细胞绝对计数和、CD4/ CD8比值见下表1；分别按年龄和性分组，测定CD3CD4CD8及CD4/ CD8比值，见表2所示，在年龄、性别分布上无显著的统计学意义（P>0.05）。
表1152名健康成人检测结果分析及参考范围（单位：个/ul）
3 讨论
3.1 T淋巴细胞在机体抗感染、抗肿瘤等方面具有十分重要的意义，尤其是CD4Th细胞，经活化巨噬细胞而诱生炎症，在清除细胞内病原感染中具有重要作用，而表达于活化的CD4T细胞表面的CD40L是B细胞表面CD40分子（B细胞的协同刺激受体）的配体，能促使B细胞充分活化、增殖分化为浆细胞合成抗体，所以T淋巴细胞是机体免疫系统内功能最重要的一群淋巴细胞，其主要由CD4和CD8两群细胞组成，T细胞的CD4分子是HIV的受体，HIV通常首先侵犯和破坏CD4T细胞，其数量和功能降低是HIV感染引起机体免疫功能缺陷的主要原因，外周血中CD4T淋巴细胞的数量对于确定HIV感染状况，是否进入AIDS期，预产期机会性感染的可能性和评价治疗效果具有极其重要的作用[3] [4]。CD8T细胞是获得细胞免疫力的重要效应细胞。在HIV感染者中，CD8T细胞在控制HIV复制中起重要作用[5]。CD4/CD8比值反映HIV 疾病状况，可作为评价病情发展程度的重要指标之一[6]。
3.2由于淋巴细胞免疫分型受生活环境、种族、地域等因素的影响，故不同的地区的参考值不同。上海地区采用双平台的方法检测的结果：健康成年人CD4T细胞计数平均值为726.99±255.21，CD8细胞计数平均值为539.58±134.07，CD4/CD8比值平均值为1.49±0.57，与之相比，绵阳T淋巴细胞亚群的分类均值比上海少76个/ul，无显著性差异；美国疾病预防控中心测定的成人CD4计数正常值为844±247个/ ul，CD8计数正常值为(539.58±134.07)并规定CD4绝对计数≤500个/ ul，作为AIDS诊断的依据之一，并可开始抗病毒治疗[7]，绵阳市的正常人T淋巴细胞计数与其相比CD4少194(P<0.05),在统计学上有显著性差异；而我国现在采用的抗病毒治疗选择时机均采用美国的标准，所以在进行抗病毒治疗时所需的CD4也应相应下降标准；同时通过比较可知，男女之间及不同年龄组间CD4比较，无显著性差异。
3.3综上所诉，绵阳地区健康成人CD4绝对计数均值较国外低，但比值相近，男女之间及年龄之间无显著性差异，可用统一的正常值范围，。由于实验室检测方法不同、人群不同、环境不同、样本量不同和样本收集时间不同等都可以导致检测结果不同[7] ，故各实验室都应建立自己本地区实验室的健康成人参考值范围，以利于指导本地区的抗病毒治疗方案的制定以及AIDS病人疗效的观察，为艾滋病的预防治疗提供科学的依据。
参考文献
[1]刘伟，陈杰。李志军，等.广西HIV感染流行分析[J] .广西预防医学，2001,10,7（5）：257-260 .
[2]刘帅凤，刘伟，陈杰，等.广西壮族自治区健康成年人T淋巴细胞亚群分类绝对计数及CD4/CD8比值调查[J] .中国艾滋病性病，2004，12,10（6）：413-415.
[4]Ehmann WC,Eyster SE,VilsonSE,et al. Relationship of CD4 lymphocyte counts to survival in a cohor of hemophiliacs infected with HIV. Multicenter Hemophilia Cohort Study[J].J Acquir Immune Defic Syndr,1994,July:1095-1098.
[5]蒋为民，潘孝彰，康来仪，等.上海地区健康成人不同年龄组间CD4、C48淋巴细胞计数正常值调查[J] .中华传染病杂志，2002.8:20（4）：203-205.
[8]约翰G，巴特利特，乔尔E，等.艾滋病病毒感染的诊断治疗[M] .北京：科学出版社，2002.32.