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[摘 要]文章建立了肤痒颗粒的定性定量检测方法。
[关键词]肤痒颗粒 检验
中图分类号：R286 文献标识码：A 文章编号：1009-914X（2014）01-0275-01
肤痒颗粒收载于《中华人民共和国卫生部药品标准·中药成方制剂》，由红花、地肤子、白英、苍耳子、川芎5味中药组成，具有祛风活血、除湿止痒的功效，临床用于皮肤瘙痒症，湿疹，荨麻疹等瘙痒性皮肤病。原质量标准中只有2个理化鉴别，无薄层定性和含量测定方法。为了更好地控制制剂的内在质量，本试验对其定性、含量测定方法进行了探索。
一 仪器与试药
Agilent 1100高效液相色谱仪，G1314A紫外检测器。水为重蒸馏水，所用试剂均为分析纯。地肤子对照药材、齐墩果酸对照品、羟基红花黄色素A（hydroxysafflor A，HYSA）对照品均由中国药品生物制品检定所提供。白英对照药材购自湖北省中药材公司，经湖北中医学院药学院鉴定教研室鉴定。肤痒颗粒由湖北东信药业有限公司提供。
二 方法与结果
1 定性鉴别
（1）地肤子的薄层色谱鉴别
取本品4.0g，研细，加乙醇40mL，超声处理5min，滤过，滤液加盐酸3.0 mL，加热回流2h，溶液放至室温后，滤过，滤液于水浴上挥去乙醇至干，残渣加水20mL使溶解，转移至分液漏斗中，以石油醚（60～90℃）萃取2次，每次15mL，合并石油醚提取液，置水浴上挥干，残渣加乙醇1mL溶解，作为供试品溶液。另取地肤子对照药材1g，加甲醇20mL，超声处理5min，滤过，加盐酸1.5mL，加热回流2h，放至室温后，滤过，于水浴上挥去乙醇至干，残渣加水10mL使溶解，溶液转移至分液漏斗中，以石油醚（60～90℃）萃取2次，每次10mL，合并石油醚提取液，置水浴上挥干，残渣加乙醇1mL溶解，作为对照药材溶液。再取齐墩果酸对照品适量，以乙醇溶解，制成每1mL含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法[2005年版《中华人民共和国药典》（一部）附录ⅥB]试验，吸取上述3种溶液各10μL，分别点于同一以0.5%羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以石油醚-三氯甲烷-丙酮（5∶2∶2）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，于105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。经3批样品及阴性对照试验，结果阴性无干扰。
（2）白英的薄层色谱鉴别
取本品6.0g，加乙醇50mL，加热回流30min，放冷，滤过，滤液回收乙醇至干，残渣加水20mL使溶解，溶液转移至分液漏斗中，以乙酸乙酯萃取2次，每次15mL，合并乙酸乙酯提取液，置蒸发皿中蒸干，残渣加甲醇1mL溶解，作为供试品溶液。取白英对照药材2.0g，加乙醇20mL，加热回流30min，放至室温，滤过，滤液置水浴上挥干，残渣加水10mL溶解，转移至分液漏斗中，以乙酸乙酯萃取2次，每次10mL，合并乙酸乙酯提取液，置水浴上挥干，残渣加甲醇2.0mL使溶解，作为对照药材溶液。照薄层色谱法[2005年版《中华人民共和国药典》（一部）附录ⅥB]试验，吸取上述两种溶液各10μL，分别点于同一以0.5%羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯（5∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，于105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。经3批样品及阴性对照试验，结果阴性无干扰。
2 含量测定
（1）色谱条件及系統适应性试验
色谱柱：Alltima C18柱（5μm，250mm×4.6mm）；流动相：甲醇-乙腈-0.7%磷酸溶液（24∶6∶70）；检测波长：403nm；柱温：25℃；流速：1.0 mL/min；理论塔板数按HYSA峰计算应不低于3000，阴性对照无干扰。在上述条件下，HYSA的保留时间约为11min（见图1）。
（2）供试品溶液的制备
取本品颗粒1袋，精密称定，混匀，研碎，取约2g，精密称定，置25mL量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取本品水溶液5mL，置50mL量瓶中，以甲醇稀释至刻度，滤过，取续滤液25mL，置蒸发皿中挥去甲醇至干，残渣以25%的甲醇溶解并转移至5mL量瓶中，以25%的甲醇溶液稀释至刻度，摇匀，即得。
（3）对照品溶液的制备
取HYSA对照品适量，精密称定，加25%甲醇制成每1mL含0.13mg的溶液，即得。
（4）阴性对照液的制备
取处方量1/10的药材（缺红花），置1000mL烧瓶中，按生产工艺加水提取2次，合并提取液，静置8h，取上清液浓缩至适量体积，转移至100mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，取溶液2mL置25mL量瓶中，加入糊精0.5g，蔗糖粉1.5g，照供试品溶液制备方法制备，即得。
（5）线性关系的考察
精密称取HYSA对照品6.40mg，置50mL量瓶中，加25%甲醇溶解并稀释至刻度，制成每1mL含HYSA0.128mg的溶液作为储备液。精密吸取储备液0.1、0.2、0.4、0.6、0.8mL置1mL量瓶中，加25%甲醇稀释至刻度，制成每1mL分别含HYSA0.0128、0.0256、0.0512、0.0768、0.1024mg的溶液。精密吸取上述溶液各10μL，注入高效液相色谱仪，测定。以峰面积为横坐标，HYSA的量（μg）为纵坐标，绘制标准曲线。线形回归方程为：Y=-2165.1X23.921，r=0.9998。HYSA在0.128～1.024μg范围内与峰面积呈良好的线性关系。
（6）精密度试验
取本品同一供试品溶液，重复进样5次，测定峰面积，结果HYSA峰面积积分值的相对标准偏差小于2.0%，表明仪器精密度良好。
（7）稳定性试验
取本品同一供试品溶液，分别于制备后放置0、1、2、4、8、12h，精密吸取20 μL，注入高效液相色谱仪，测定，计算HYSA含量，HYSA含量相对标准偏差小于2.0%，表明供试品溶液在制备后12h内测定基本稳定。
（8）重现性试验
精密称取本品同一批样品5份，按正文含量测定项下方法进行测定，结果HYSA含量标准偏差小于2.0%，表明本方法重现性良好。
（9）回收率试验
取已知含量的样品（含HYSA为0.6629mg/g）约1.0g，精密称定，置25mL量瓶中，分别精密加入HYSA对照品适量，按正文含量测定项下方法操作，计算回收率。本法平均回收率为99.58%，RSD<5.0%，表明回收率较好。
三 讨论
本研究参照《中华人民共和国卫生部药品标准·中药成方制剂》“肤痒冲剂”质量标准[1]拟定，采用TLC法对制剂中的地肤子、白英进行鉴别，选择的制样方法及展开剂具有分离度好、重复性好、专属性强的特点。
含量测定以红花中HYSA为指标成分，采用高效液相色谱法进行含量测定。其方法的建立，参照2005年版《中华人民共和国药典》（一部）红花项下含量测定的方法，根据本制剂的实际情况，将流动相调整为上述比例，结果表明，该方法简便，准确，专属性强，能客观地反映本品的内在质量。
参考文献
[1] 吴和珍，宋爱华，杨艳芳，施峰，刘焱文，肤痒颗粒的质量控制研究，论文网，2012，01.
[关键词]肤痒颗粒 检验
中图分类号：R286 文献标识码：A 文章编号：1009-914X（2014）01-0275-01
肤痒颗粒收载于《中华人民共和国卫生部药品标准·中药成方制剂》，由红花、地肤子、白英、苍耳子、川芎5味中药组成，具有祛风活血、除湿止痒的功效，临床用于皮肤瘙痒症，湿疹，荨麻疹等瘙痒性皮肤病。原质量标准中只有2个理化鉴别，无薄层定性和含量测定方法。为了更好地控制制剂的内在质量，本试验对其定性、含量测定方法进行了探索。
一 仪器与试药
Agilent 1100高效液相色谱仪，G1314A紫外检测器。水为重蒸馏水，所用试剂均为分析纯。地肤子对照药材、齐墩果酸对照品、羟基红花黄色素A（hydroxysafflor A，HYSA）对照品均由中国药品生物制品检定所提供。白英对照药材购自湖北省中药材公司，经湖北中医学院药学院鉴定教研室鉴定。肤痒颗粒由湖北东信药业有限公司提供。
二 方法与结果
1 定性鉴别
（1）地肤子的薄层色谱鉴别
取本品4.0g，研细，加乙醇40mL，超声处理5min，滤过，滤液加盐酸3.0 mL，加热回流2h，溶液放至室温后，滤过，滤液于水浴上挥去乙醇至干，残渣加水20mL使溶解，转移至分液漏斗中，以石油醚（60～90℃）萃取2次，每次15mL，合并石油醚提取液，置水浴上挥干，残渣加乙醇1mL溶解，作为供试品溶液。另取地肤子对照药材1g，加甲醇20mL，超声处理5min，滤过，加盐酸1.5mL，加热回流2h，放至室温后，滤过，于水浴上挥去乙醇至干，残渣加水10mL使溶解，溶液转移至分液漏斗中，以石油醚（60～90℃）萃取2次，每次10mL，合并石油醚提取液，置水浴上挥干，残渣加乙醇1mL溶解，作为对照药材溶液。再取齐墩果酸对照品适量，以乙醇溶解，制成每1mL含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法[2005年版《中华人民共和国药典》（一部）附录ⅥB]试验，吸取上述3种溶液各10μL，分别点于同一以0.5%羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以石油醚-三氯甲烷-丙酮（5∶2∶2）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，于105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。经3批样品及阴性对照试验，结果阴性无干扰。
（2）白英的薄层色谱鉴别
取本品6.0g，加乙醇50mL，加热回流30min，放冷，滤过，滤液回收乙醇至干，残渣加水20mL使溶解，溶液转移至分液漏斗中，以乙酸乙酯萃取2次，每次15mL，合并乙酸乙酯提取液，置蒸发皿中蒸干，残渣加甲醇1mL溶解，作为供试品溶液。取白英对照药材2.0g，加乙醇20mL，加热回流30min，放至室温，滤过，滤液置水浴上挥干，残渣加水10mL溶解，转移至分液漏斗中，以乙酸乙酯萃取2次，每次10mL，合并乙酸乙酯提取液，置水浴上挥干，残渣加甲醇2.0mL使溶解，作为对照药材溶液。照薄层色谱法[2005年版《中华人民共和国药典》（一部）附录ⅥB]试验，吸取上述两种溶液各10μL，分别点于同一以0.5%羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯（5∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，于105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。经3批样品及阴性对照试验，结果阴性无干扰。
2 含量测定
（1）色谱条件及系統适应性试验
色谱柱：Alltima C18柱（5μm，250mm×4.6mm）；流动相：甲醇-乙腈-0.7%磷酸溶液（24∶6∶70）；检测波长：403nm；柱温：25℃；流速：1.0 mL/min；理论塔板数按HYSA峰计算应不低于3000，阴性对照无干扰。在上述条件下，HYSA的保留时间约为11min（见图1）。
（2）供试品溶液的制备
取本品颗粒1袋，精密称定，混匀，研碎，取约2g，精密称定，置25mL量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取本品水溶液5mL，置50mL量瓶中，以甲醇稀释至刻度，滤过，取续滤液25mL，置蒸发皿中挥去甲醇至干，残渣以25%的甲醇溶解并转移至5mL量瓶中，以25%的甲醇溶液稀释至刻度，摇匀，即得。
（3）对照品溶液的制备
取HYSA对照品适量，精密称定，加25%甲醇制成每1mL含0.13mg的溶液，即得。
（4）阴性对照液的制备
取处方量1/10的药材（缺红花），置1000mL烧瓶中，按生产工艺加水提取2次，合并提取液，静置8h，取上清液浓缩至适量体积，转移至100mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，取溶液2mL置25mL量瓶中，加入糊精0.5g，蔗糖粉1.5g，照供试品溶液制备方法制备，即得。
（5）线性关系的考察
精密称取HYSA对照品6.40mg，置50mL量瓶中，加25%甲醇溶解并稀释至刻度，制成每1mL含HYSA0.128mg的溶液作为储备液。精密吸取储备液0.1、0.2、0.4、0.6、0.8mL置1mL量瓶中，加25%甲醇稀释至刻度，制成每1mL分别含HYSA0.0128、0.0256、0.0512、0.0768、0.1024mg的溶液。精密吸取上述溶液各10μL，注入高效液相色谱仪，测定。以峰面积为横坐标，HYSA的量（μg）为纵坐标，绘制标准曲线。线形回归方程为：Y=-2165.1X23.921，r=0.9998。HYSA在0.128～1.024μg范围内与峰面积呈良好的线性关系。
（6）精密度试验
取本品同一供试品溶液，重复进样5次，测定峰面积，结果HYSA峰面积积分值的相对标准偏差小于2.0%，表明仪器精密度良好。
（7）稳定性试验
取本品同一供试品溶液，分别于制备后放置0、1、2、4、8、12h，精密吸取20 μL，注入高效液相色谱仪，测定，计算HYSA含量，HYSA含量相对标准偏差小于2.0%，表明供试品溶液在制备后12h内测定基本稳定。
（8）重现性试验
精密称取本品同一批样品5份，按正文含量测定项下方法进行测定，结果HYSA含量标准偏差小于2.0%，表明本方法重现性良好。
（9）回收率试验
取已知含量的样品（含HYSA为0.6629mg/g）约1.0g，精密称定，置25mL量瓶中，分别精密加入HYSA对照品适量，按正文含量测定项下方法操作，计算回收率。本法平均回收率为99.58%，RSD<5.0%，表明回收率较好。
三 讨论
本研究参照《中华人民共和国卫生部药品标准·中药成方制剂》“肤痒冲剂”质量标准[1]拟定，采用TLC法对制剂中的地肤子、白英进行鉴别，选择的制样方法及展开剂具有分离度好、重复性好、专属性强的特点。
含量测定以红花中HYSA为指标成分，采用高效液相色谱法进行含量测定。其方法的建立，参照2005年版《中华人民共和国药典》（一部）红花项下含量测定的方法，根据本制剂的实际情况，将流动相调整为上述比例，结果表明，该方法简便，准确，专属性强，能客观地反映本品的内在质量。
参考文献
[1] 吴和珍，宋爱华，杨艳芳，施峰，刘焱文，肤痒颗粒的质量控制研究，论文网，2012，01.