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摘要：比较了5种DNA条形码的重点关注基因psbA-trnH、ITS、ITS2、rbcL、matK在苍耳属中的遗传距离，以期为植物DNA条形码标准基因的筛选研究提供参考。用通用引物对7种苍耳属植物的psbA-trnH、ITS、ITS2、rbcL、matK基因进行扩增、测序，利用MEGA 5.1软件计算遗传距离及标准误。结果表明：ITS2、ITS、matK、psbA-trnH、rbcL基因在苍耳属中的遗传距离依次减小；ITS2、psbA-trnH、ITS、matK、rbcL基因在苍耳属中的遗传距离标准误依次减小。因此从苍耳属的植物层面看，ITS基因作为植物DNA条形码要比ITS2基因具有更好的稳定性；作为植物DNA条形码，matK基因要优于psbA-trnH基因。
关键词：DNA条形码；遗传距离；苍耳属
中图分类号： S567.210.1 文献标志码： A 文章编号：1002-1302（2014）04-0036-02
收稿日期：2013-08-07
基金项目：江苏出入境检验检疫局科技项目（编号：2012KJ54）。
作者简介：胡伟毅（1984—），男，河北宣化人，硕士，主要从事港口外来有害生物的截获工作。E-mail：94087540@qq.com。植物DNA条形码技术是针对植物基因组中的特定基因进行片段扩增、测序而发现其碱基变化规律的技术手段，此概念由加拿大科学家Paul于2003年正式提出[1]，此技术在动物COⅠ基因中的应用较为成熟[2-4]，但由于COⅠ基因在植物中的变化较为保守，不能起到很好的区分作用，使得植物DNA条形码技术的研究重点仍在通用基因片段的应用、筛选和搭配上[5]。psbA-trnH、ITS、ITS2、rbcL及matK序列是植物DNA条形码重点关注的序列[6-9]。本试验比较了5种DNA条形码重点关注基因psbA-trnH、ITS、ITS2、rbcL、matK在苍耳属（Xanthium）中的遗传距离，以期为植物DNA条形码标准基因的筛选研究提供参考。
1材料与方法
1.1材料与试剂
试验用材料为7种苍耳属植物：北美苍耳（Xanthium chinese）、苍耳（Xanthium sibiricum）、刺苍耳（Xanthium spinosum）、西方苍耳（Xanthium occidentale）、巴西苍耳（Xanthium brasilicum）、美丽苍耳（Xanthium speciosum）、宾州苍耳（Xanthium pensylvanicum），这些外来苍耳均为2012年在进口大豆中截获，并由中国检验检疫科学院鉴定的样本。
试验用试剂有DNeasy Plant Mini Kit、2×Taq master mix、琼脂糖、GoldenviewⅠ、引物[10]（详见表1）等。
1.2试验方法
1.2.1DNA的提取采用DNeasy Plant Mini Kit试剂盒法提取DNA，按照说明书逐步操作，可得到200 μL DNA样品，于-20 ℃冰箱保存。
3结论
综合本试验结果，从苍耳属的植物层面看，ITS基因作为植物DNA条形码要比ITS2基因具有更好的稳定性；matK基因作为植物DNA条形码要优于psbA-trnH基因。
参考文献：
[1]Tautz D，Arctander P，Minelli A，et al. A plea for DNA taxonomy[J]. Trends in Ecology and Evolution，2003，18（2）：70-74.
[2]朱立静，陈淑吟，许晓风，等. 四角蛤蜊江苏群体线粒体COⅠ基因片段序列研究[J]. 江苏农业科学，2010（4）：33-35，97.
[3]姜帆，刘佳琪，李志红，等. 基于DNA条形码的广西苦瓜中实蝇幼虫分子鉴定研究[J]. 植物保护，2011，37（4）：150-153.
[4]李鹏飞，朱文斌，贺舟挺，等. 东海带鱼DNA条形码的建立及COⅠ序列变异分析[J]. 浙江海洋学院学报：自然科学版，2013，32（1）：6-9.
[5]Chase M W，Salamin N，Wilkinson M，et al. Land plants and DNA barcodes：short-term and long-term goals[J]. Philosophical Transactions of the Royal Society of London. Series B，Biological Sciences，2005，360（1462）：1889-1895.
[6]任保青，陈之端. 植物DNA条形码技术[J]. 植物学报，2010，45（1）：1-12.
[7]张欣，于瑞祥，方晓明，等. 橄榄油掺假检测技术的研究进展[J]. 中国油脂，2013，38（3）：67-71.
[8]庞晓慧，宋经元，陈士林. 应用DNA条形码技术鉴定中药材灯心草[J]. 中国中药杂志，2012，37（8）：1097-1099.
[9]伏建国，杨晓军，钱路，等. 植物DNA条形码技术在出入境检验检疫领域的应用[J]. 植物检疫，2012，2（02）：64-69.
[10]高连明，刘杰，蔡杰，等. 关于植物DNA条形码研究技术规范[J]. 植物分类与资源学报，2012，34（6）：592-606.
[11]Tamura K，Peterson D，Peterson N，et al. MEGA5：molecular evolutionary genetics analysis using maximum likelihood，evolutionary distance，and maximum parsimony methods[J]. Molecular Biology and Evolution，2011，28（10）：2731-2739.
关键词：DNA条形码；遗传距离；苍耳属
中图分类号： S567.210.1 文献标志码： A 文章编号：1002-1302（2014）04-0036-02
收稿日期：2013-08-07
基金项目：江苏出入境检验检疫局科技项目（编号：2012KJ54）。
作者简介：胡伟毅（1984—），男，河北宣化人，硕士，主要从事港口外来有害生物的截获工作。E-mail：94087540@qq.com。植物DNA条形码技术是针对植物基因组中的特定基因进行片段扩增、测序而发现其碱基变化规律的技术手段，此概念由加拿大科学家Paul于2003年正式提出[1]，此技术在动物COⅠ基因中的应用较为成熟[2-4]，但由于COⅠ基因在植物中的变化较为保守，不能起到很好的区分作用，使得植物DNA条形码技术的研究重点仍在通用基因片段的应用、筛选和搭配上[5]。psbA-trnH、ITS、ITS2、rbcL及matK序列是植物DNA条形码重点关注的序列[6-9]。本试验比较了5种DNA条形码重点关注基因psbA-trnH、ITS、ITS2、rbcL、matK在苍耳属（Xanthium）中的遗传距离，以期为植物DNA条形码标准基因的筛选研究提供参考。
1材料与方法
1.1材料与试剂
试验用材料为7种苍耳属植物：北美苍耳（Xanthium chinese）、苍耳（Xanthium sibiricum）、刺苍耳（Xanthium spinosum）、西方苍耳（Xanthium occidentale）、巴西苍耳（Xanthium brasilicum）、美丽苍耳（Xanthium speciosum）、宾州苍耳（Xanthium pensylvanicum），这些外来苍耳均为2012年在进口大豆中截获，并由中国检验检疫科学院鉴定的样本。
试验用试剂有DNeasy Plant Mini Kit、2×Taq master mix、琼脂糖、GoldenviewⅠ、引物[10]（详见表1）等。
1.2试验方法
1.2.1DNA的提取采用DNeasy Plant Mini Kit试剂盒法提取DNA，按照说明书逐步操作，可得到200 μL DNA样品，于-20 ℃冰箱保存。
3结论
综合本试验结果，从苍耳属的植物层面看，ITS基因作为植物DNA条形码要比ITS2基因具有更好的稳定性；matK基因作为植物DNA条形码要优于psbA-trnH基因。
参考文献：
[1]Tautz D，Arctander P，Minelli A，et al. A plea for DNA taxonomy[J]. Trends in Ecology and Evolution，2003，18（2）：70-74.
[2]朱立静，陈淑吟，许晓风，等. 四角蛤蜊江苏群体线粒体COⅠ基因片段序列研究[J]. 江苏农业科学，2010（4）：33-35，97.
[3]姜帆，刘佳琪，李志红，等. 基于DNA条形码的广西苦瓜中实蝇幼虫分子鉴定研究[J]. 植物保护，2011，37（4）：150-153.
[4]李鹏飞，朱文斌，贺舟挺，等. 东海带鱼DNA条形码的建立及COⅠ序列变异分析[J]. 浙江海洋学院学报：自然科学版，2013，32（1）：6-9.
[5]Chase M W，Salamin N，Wilkinson M，et al. Land plants and DNA barcodes：short-term and long-term goals[J]. Philosophical Transactions of the Royal Society of London. Series B，Biological Sciences，2005，360（1462）：1889-1895.
[6]任保青，陈之端. 植物DNA条形码技术[J]. 植物学报，2010，45（1）：1-12.
[7]张欣，于瑞祥，方晓明，等. 橄榄油掺假检测技术的研究进展[J]. 中国油脂，2013，38（3）：67-71.
[8]庞晓慧，宋经元，陈士林. 应用DNA条形码技术鉴定中药材灯心草[J]. 中国中药杂志，2012，37（8）：1097-1099.
[9]伏建国，杨晓军，钱路，等. 植物DNA条形码技术在出入境检验检疫领域的应用[J]. 植物检疫，2012，2（02）：64-69.
[10]高连明，刘杰，蔡杰，等. 关于植物DNA条形码研究技术规范[J]. 植物分类与资源学报，2012，34（6）：592-606.
[11]Tamura K，Peterson D，Peterson N，et al. MEGA5：molecular evolutionary genetics analysis using maximum likelihood，evolutionary distance，and maximum parsimony methods[J]. Molecular Biology and Evolution，2011，28（10）：2731-2739.