【摘 要】
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目的 建立检测表皮生长因子受体变体Ⅲ(EGFRvⅢ)单链抗体PD0721亲和力检测的ELISA,并且对实验条件进行优化.方法 利用本课题组制备的单链抗体PD0721,建立检测PD0721单链抗体
【机 构】
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贵州医科大学贵州省药物制剂重点实验室/省部共建药用植物功效与利用国家重点实验室,贵州贵阳550004;贵州医科大学药学院,贵州贵阳550025;贵州医科大学民族药与中药开发应用教育部工程研究中心,贵州
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目的 建立检测表皮生长因子受体变体Ⅲ(EGFRvⅢ)单链抗体PD0721亲和力检测的ELISA,并且对实验条件进行优化.方法 利用本课题组制备的单链抗体PD0721,建立检测PD0721单链抗体亲和力的间接ELISA,并采用棋盘滴定法对实验条件中的抗体抗原浓度、二抗浓度、包被条件等方面进行优化,对本方法的灵敏度及精密度进行考察.结果 使用PBS稀释抗原至1.25 mg/L于4℃包被12 h,加入120 ng/mL PD0721单链抗体以及1∶8000的酶标抗体为最佳检测结果.优化后的结果,在PD0721单链抗体浓度为15 ng/mL～480 ng/mL范围内回归模型拟合效果良好,最低检测限为7.5 ng/mL.组内差异系数为0.11％ ～0.99％,组间差异系数为0.68％ ～ 3.15％.结论 建立了能准确、稳定检测PD0721单链抗体亲和力的间接ELISA.
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