【摘 要】
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目的 探究野生型p53诱导磷酸酶1(Wip1)基因调控小鼠骨实质来源间充质干细胞(MSC)成脂肪细胞分化的作用与调控机制.方法 分离培养Wip1基因敲除小鼠的MSC,观察细胞形态,流式细
【机 构】
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安徽医科大学研究生学院,合肥 230032;军事科学院军事医学研究院辐射医学研究所,北京 100850;军事科学院军事医学研究院辐射医学研究所,北京,100850;天津医科大学总医院儿科,天津,300
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目的 探究野生型p53诱导磷酸酶1(Wip1)基因调控小鼠骨实质来源间充质干细胞(MSC)成脂肪细胞分化的作用与调控机制.方法 分离培养Wip1基因敲除小鼠的MSC,观察细胞形态,流式细胞术检测细胞表型和体外诱导分化鉴定MSC.利用油红O染色和实时荧光定量PCR(RT-PCR)比较野生型MSC(WT-MSC)和Wip1敲除MSC(Wip1-/-MSC)成脂分化后的脂滴数和成脂关键转录因子的表达.Western印迹(WB)检测脂肪细胞分化关键蛋白蛋白质磷酸酶2A(PP2A)的表达.分别收集MSC成脂诱导分化后第0、2、4和5天样本,RT-PCR检测成脂关键转录因子过氧化物酶体增殖物激活受体(PPARγ)与PP2A的表达相关性.构建EGFP-Wip1质粒转染至293T细胞,WB检测过表达Wip1后细胞表达PP2A的差异.采用siRNA-PP2A瞬时转染MSC,检测PP2A敲低后PPARγ在MSC中的表达.结果 分离培养的细胞形态呈成纤维样,细胞表型为Sca-1+CD90+CD105+CD29+MHCⅡ-CD11b-CD34-CD45-,体外可诱导分化为成脂肪细胞和成骨细胞,符合MSC判定标准.Wip1-/-MSC成脂分化后脂滴数少于WT-MSC组,同时RT-PCR检测成脂分化关键转录因子PPARγ的表达也显著低于WT-MSC(P<0.001);WB检测Wip1-/-MSC中PP2A蛋白表达亦显著下降,在293T细胞中过表达EGFP-Wip1可使PP2A蛋白表达显著上升;而PP2A-siRNA瞬时转染MSC后,成脂关键转录因子PPARγ表达则显著减少.结论 Wip1通过调控PP2A的表达影响MSC的成脂分化,为深入探讨MSC成脂分化机制提供了理论与实验依据.
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