【摘 要】
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目的 克隆铜绿假单胞菌外毒素A(PEA)基因及分析不同克隆序列中不同性质氨基酸对抗原性及三级结构的贡献.方法 以铜绿假单胞菌基因组DNA为模板,以PEA编码基因特异区段为引物,
【机 构】
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广州医学院第二附属医院过敏反应科,510260广州医学院第二附属医院耳鼻喉头颈外科,510260;
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目的 克隆铜绿假单胞菌外毒素A(PEA)基因及分析不同克隆序列中不同性质氨基酸对抗原性及三级结构的贡献.方法 以铜绿假单胞菌基因组DNA为模板,以PEA编码基因特异区段为引物,采用Touchdown PCR克隆PEA编码基因.阳性克隆经菌落PCR鉴定后进行DNA测序及Clustal X(1.83)比对分析;采用生物信息学在线软件BIMAS及SWISS-Model对所得基因编码蛋白进行抗原性评估及三级结构模拟.人为置换关键部位的氨基酸残基,考察不同性质氨基酸对三级结构的影响.结果 从铜绿假单胞菌DNA中获得3个克隆.抗原性分析及三级结构模拟结果显示,3个克隆与公开发表的序列之间存在少数氨基酸的差异;个别区段上氨基酸的改变可引起相应位点抗原性的改变,但仅有个别位点的改变对空间结构产生影响.结论 基于抗原性评估及三级结构分析,获得了不同性质氨基酸对抗原性及三级结构的贡献等信息,为PEA编码基因用于弱化抗原性靶向性毒素的构建奠定了基础.
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