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摘要：芽孢杆菌(Bacillus spp.)B1、B2、B6、B8与低毒化学农药甲基硫菌灵混配后对茄腐镰孢菌的抑制作用研究结果表明：甲基硫菌灵浓度为0.001 mg／mL时，与4种生防菌混配对茄腐镰孢菌的抑制率达到78.21％～80.93％。较生肪菌单独处理，混配的抑制率提高了43％～54％；较单独使用甲基硫菌灵，抑制率提高了14％～19％。当浓度为0.000 5 mg／mL时混配作用的抑制率为71.21％～68.48％，较生防菌单独作用，混配的抑制率提高了31％～44％；较甲基硫菌灵单独作用抑制率提高了12％～19％。当浓度继续降低后，4种生防菌分别和甲基硫菌灵混配对茄腐镰孢茵的抑制率与仅使用4种生防菌对茄腐镰孢菌的抑制率无显著差异，但较甲基硫菌灵单独作用抑制率提高27％。说明甲基硫菌灵在浓度为0.001、0.000 5 mg／mL时与4种生防菌混配，两者协同作用增强了抑制效果，对茄腐镰孢菌有很好的抑制作用。
关键词：芽孢杆菌；甲基硫菌灵；混配；抑制作用；茄腐镰孢菌
中图分类号：S 476.1
近年来发展形成的生物农药与化学防治方法相结合防治植物病虫害的策略，既能有效控制病虫害危害，又能降低农药在农副产品中的残留，因此受到了各国植物保护专家的重视。生物农药低毒、绿色、无公害，通过直接或间接的作用方式来防治虫害、病害和杂草。但从整体上看还存在一些问题，如生防菌的作用较单一、防效不稳定、防治谱较窄及生产和使用技术不完善等。但近年来，国内在苏云金杆菌与化学农药混配等方面取得了一定成就；陈志谊等人将枯草芽孢杆菌与井冈霉素进行复配，成功研制了防治水稻病害的微生物农药井冈·枯芽菌。因此，通过生防菌的菌-菌混配使用或与低毒农药混配来提高效果、扩大应用范围，达到良好的防病治虫效果，在生产和实践中是可行的。因此本文拟通过对多种植物病原真菌具有较强抑制作用的几种芽孢杆菌与农药的混配试验，筛选与生防菌混配的化学农药。旨为进一步提高生防菌抑菌防病效果，应用于生产提供理论依据。
芽孢杆菌B1、B2、B6、B8是甘肃农业大学草业学院植病教研组在豌豆根际周围土壤和东祁连山高寒草地土壤中筛选出的对豌豆根腐病菌、小麦纹枯菌、小麦根腐菌、小麦全蚀病菌、辣椒立枯病菌、茄子菌核菌、茄子枯萎菌、番茄叶霉菌、番茄灰霉菌、大蒜白腐病菌和番茄早疫菌、茄腐镰孢菌等有显著抑菌作用的几种生防菌，抑菌谱广。
1 材料与方法
1.1 供试菌株和杀菌剂
生防菌芽孢杆菌B1、B2、B6、B8由甘肃农业大学草业学院植病教研组提供。
病原菌茄腐镰孢菌[Fusarium solani(Mart.)Sacc.]由甘肃农业大学草业学院植病系提供。
70％甲基硫菌灵可湿性粉剂为西安美邦化工产品。
1.2 供试培养基
细菌培养用肉汁胨培养基；真菌培养和测定拮抗效果用PDA培养基。
1.3 试验方法
1.3.1 甲基硫菌灵对茄腐镰孢菌的抑制作用
在以上试验的基础上，将筛选出的农药制备成PDA带毒培养基(共设5个浓度)，然后把灭菌好的滤纸条(8.3 cm×0.4 cm)，十字交叉放入培养皿中，用移液枪吸取10μL的菌悬液(制备如1.3.2)均匀加在滤纸上。在滤纸交叉间分别接4块病原菌菌饼。并设3个对照：(1)滤纸条加无菌水置于带毒培养基，即为单一农药对照；(2)滤纸条加生防菌液置于无毒培养基，即为单一生防菌对照；(3)滤纸条加无菌水置于无菌培养基，即为空白对照。各处理重复3次。置于27℃恒温箱中，待空白对照长到平皿边缘时，取出培养皿测量菌落直径。采用十字交叉法测量菌落直径。根据1.3.5计算公式计算各浓度对病原菌的抑制作用。
1.3.5 计算公式
菌落生长抑制率=(对照菌落直径一处理菌落直径)／(对照菌落直径一菌饼直径)×100％。
2 结果分析
2.1 农药对病原菌的抑制作用
由表1可见甲基硫菌灵浓度为0.25～1.00 mg／mL对茄腐镰孢菌的抑制率为100％。
2.2 生防菌在不同药剂浓度培养基中的生长情况
甲基硫菌灵浓度降为0.25 mg／mL时对4种生防菌无抑制作用，其他浓度下对生防菌均有抑制作用(表2)。
2.3 甲基硫菌灵不同浓度对茄腐镰孢菌的抑制作用
甲基硫菌灵对茄腐镰孢菌的毒力测定结果表明(表3)，甲基硫菌灵对此菌具有很强的抑菌效果，EC50为0.002 mg／mL，毒力回归方程为y=10.657 2.096 1 x，相关系数达到0.997 7。在0.008 mg／mL浓度下甲基硫菌灵对茄腐镰孢菌有很好的抑制作用，抑制率可高达89.41％。
2.4 菌药混配抑制效果
由表4可以看出：在甲基硫菌灵浓度为0.001 mg／mL时，与4种生防菌混配对茄腐镰孢菌的抑制率分别达到78.21％、77.04％、75.88％、80.93％，B1、B2、B6、B8单独作用的抑制率分别为32.30％、30.74％、32.68％、26.85％，此浓度下甲基硫菌灵单独作用的抑制率为61.48％。较生防菌单独处理，混配的抑制率提高了43％～54％；较单独使用甲基硫菌灵，抑制率提高了14％～19％。当浓度为0.0005 mg／mL时混配作用的抑制率分别为71.21％，66.54％，64.20％，68.48％，较生防菌单独作用，混配的抑制率提高了3l％～44％；较甲基硫菌灵单独作用抑制率提高了12％～19％。当浓度继续降低后，4种生防菌分别和甲基硫菌灵混配对茄腐镰孢菌的抑制率与仅使用4种生防菌对茄腐镰孢菌的抑制率无显著差异，但较甲基硫菌灵单独作用抑制率提高27％。说明甲基硫菌灵在浓度为0.001、0.000 5mg／mL时与4种生防菌混配有良好的防治茄腐镰孢菌的效果。
3 结论与讨论
近年来，我国利用生防菌与农药混配抑制病虫害的工作已取得一定成就，马良进等进行了苏云金杆菌与农药混配，研究表明苏云金杆菌菌体浓度为1012个／L与0.36％苦参碱水剂(5 000倍液)或1.8％阿维菌素乳油(5 000倍液)混配杀虫效果最好；姜延超等进行了微生物杀虫剂BT与化学农药复配防治大袋蛾的研究也筛选出了较好的混配组合；李素英等人将生防菌与多菌灵混用防治棉花黄萎病，结果表明大部分混用防治效果优于单用效果。国外Kantan，J.提出用化学药物弱化病原菌后，有利于生物防治菌定殖并提高其防治效果。目前植物源农药、微生物农药与化学农药混配开发的品种有增加的趋势。
从几种枯草芽孢杆菌与甲基硫菌灵的混配研究可看出：甲基硫菌灵在适宜浓度与生防菌混配，不仅可显著提高抑菌效果，而且对生防菌有促进生长的作用，有利于生防菌生长繁殖，因此两者混配，既发挥了农药杀菌速度快、防效稳定的优点，也提高了生防菌的抑菌效果，达到了两者优势互补、用量减少、防效提高的目的，与以上文献报道基本一致。本文未涉及的其他农药与生防菌混配研究仍需进一步探讨；菌一药混配在田间的防效有待进一步研究。
关键词：芽孢杆菌；甲基硫菌灵；混配；抑制作用；茄腐镰孢菌
中图分类号：S 476.1
近年来发展形成的生物农药与化学防治方法相结合防治植物病虫害的策略，既能有效控制病虫害危害，又能降低农药在农副产品中的残留，因此受到了各国植物保护专家的重视。生物农药低毒、绿色、无公害，通过直接或间接的作用方式来防治虫害、病害和杂草。但从整体上看还存在一些问题，如生防菌的作用较单一、防效不稳定、防治谱较窄及生产和使用技术不完善等。但近年来，国内在苏云金杆菌与化学农药混配等方面取得了一定成就；陈志谊等人将枯草芽孢杆菌与井冈霉素进行复配，成功研制了防治水稻病害的微生物农药井冈·枯芽菌。因此，通过生防菌的菌-菌混配使用或与低毒农药混配来提高效果、扩大应用范围，达到良好的防病治虫效果，在生产和实践中是可行的。因此本文拟通过对多种植物病原真菌具有较强抑制作用的几种芽孢杆菌与农药的混配试验，筛选与生防菌混配的化学农药。旨为进一步提高生防菌抑菌防病效果，应用于生产提供理论依据。
芽孢杆菌B1、B2、B6、B8是甘肃农业大学草业学院植病教研组在豌豆根际周围土壤和东祁连山高寒草地土壤中筛选出的对豌豆根腐病菌、小麦纹枯菌、小麦根腐菌、小麦全蚀病菌、辣椒立枯病菌、茄子菌核菌、茄子枯萎菌、番茄叶霉菌、番茄灰霉菌、大蒜白腐病菌和番茄早疫菌、茄腐镰孢菌等有显著抑菌作用的几种生防菌，抑菌谱广。
1 材料与方法
1.1 供试菌株和杀菌剂
生防菌芽孢杆菌B1、B2、B6、B8由甘肃农业大学草业学院植病教研组提供。
病原菌茄腐镰孢菌[Fusarium solani(Mart.)Sacc.]由甘肃农业大学草业学院植病系提供。
70％甲基硫菌灵可湿性粉剂为西安美邦化工产品。
1.2 供试培养基
细菌培养用肉汁胨培养基；真菌培养和测定拮抗效果用PDA培养基。
1.3 试验方法
1.3.1 甲基硫菌灵对茄腐镰孢菌的抑制作用
在以上试验的基础上，将筛选出的农药制备成PDA带毒培养基(共设5个浓度)，然后把灭菌好的滤纸条(8.3 cm×0.4 cm)，十字交叉放入培养皿中，用移液枪吸取10μL的菌悬液(制备如1.3.2)均匀加在滤纸上。在滤纸交叉间分别接4块病原菌菌饼。并设3个对照：(1)滤纸条加无菌水置于带毒培养基，即为单一农药对照；(2)滤纸条加生防菌液置于无毒培养基，即为单一生防菌对照；(3)滤纸条加无菌水置于无菌培养基，即为空白对照。各处理重复3次。置于27℃恒温箱中，待空白对照长到平皿边缘时，取出培养皿测量菌落直径。采用十字交叉法测量菌落直径。根据1.3.5计算公式计算各浓度对病原菌的抑制作用。
1.3.5 计算公式
菌落生长抑制率=(对照菌落直径一处理菌落直径)／(对照菌落直径一菌饼直径)×100％。
2 结果分析
2.1 农药对病原菌的抑制作用
由表1可见甲基硫菌灵浓度为0.25～1.00 mg／mL对茄腐镰孢菌的抑制率为100％。
2.2 生防菌在不同药剂浓度培养基中的生长情况
甲基硫菌灵浓度降为0.25 mg／mL时对4种生防菌无抑制作用，其他浓度下对生防菌均有抑制作用(表2)。
2.3 甲基硫菌灵不同浓度对茄腐镰孢菌的抑制作用
甲基硫菌灵对茄腐镰孢菌的毒力测定结果表明(表3)，甲基硫菌灵对此菌具有很强的抑菌效果，EC50为0.002 mg／mL，毒力回归方程为y=10.657 2.096 1 x，相关系数达到0.997 7。在0.008 mg／mL浓度下甲基硫菌灵对茄腐镰孢菌有很好的抑制作用，抑制率可高达89.41％。
2.4 菌药混配抑制效果
由表4可以看出：在甲基硫菌灵浓度为0.001 mg／mL时，与4种生防菌混配对茄腐镰孢菌的抑制率分别达到78.21％、77.04％、75.88％、80.93％，B1、B2、B6、B8单独作用的抑制率分别为32.30％、30.74％、32.68％、26.85％，此浓度下甲基硫菌灵单独作用的抑制率为61.48％。较生防菌单独处理，混配的抑制率提高了43％～54％；较单独使用甲基硫菌灵，抑制率提高了14％～19％。当浓度为0.0005 mg／mL时混配作用的抑制率分别为71.21％，66.54％，64.20％，68.48％，较生防菌单独作用，混配的抑制率提高了3l％～44％；较甲基硫菌灵单独作用抑制率提高了12％～19％。当浓度继续降低后，4种生防菌分别和甲基硫菌灵混配对茄腐镰孢菌的抑制率与仅使用4种生防菌对茄腐镰孢菌的抑制率无显著差异，但较甲基硫菌灵单独作用抑制率提高27％。说明甲基硫菌灵在浓度为0.001、0.000 5mg／mL时与4种生防菌混配有良好的防治茄腐镰孢菌的效果。
3 结论与讨论
近年来，我国利用生防菌与农药混配抑制病虫害的工作已取得一定成就，马良进等进行了苏云金杆菌与农药混配，研究表明苏云金杆菌菌体浓度为1012个／L与0.36％苦参碱水剂(5 000倍液)或1.8％阿维菌素乳油(5 000倍液)混配杀虫效果最好；姜延超等进行了微生物杀虫剂BT与化学农药复配防治大袋蛾的研究也筛选出了较好的混配组合；李素英等人将生防菌与多菌灵混用防治棉花黄萎病，结果表明大部分混用防治效果优于单用效果。国外Kantan，J.提出用化学药物弱化病原菌后，有利于生物防治菌定殖并提高其防治效果。目前植物源农药、微生物农药与化学农药混配开发的品种有增加的趋势。
从几种枯草芽孢杆菌与甲基硫菌灵的混配研究可看出：甲基硫菌灵在适宜浓度与生防菌混配，不仅可显著提高抑菌效果，而且对生防菌有促进生长的作用，有利于生防菌生长繁殖，因此两者混配，既发挥了农药杀菌速度快、防效稳定的优点，也提高了生防菌的抑菌效果，达到了两者优势互补、用量减少、防效提高的目的，与以上文献报道基本一致。本文未涉及的其他农药与生防菌混配研究仍需进一步探讨；菌一药混配在田间的防效有待进一步研究。