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摘 要：食品微生物检测是一项重要的工作，其可以保证食品的安全性，可以避免使用者出现中毒或者身体不适等问题。人们的生活水平越来越高，对食品安全问题也越来越重视，所以，食品安全检测部门一定要做好检测工作，要对检测技术以及设备进行优化。快速测试片是食品微生物检测中一项新型的检测方法，其有着较多的优点，不但检测的准确率高，而且检测的效率也比较高。本文对快速测试片在食品微生物检测中的应用进行了介绍，希望可以促进这项检测技术的推广。
关键词：快速测试片；食品；微生物；检测；应用
快速测试片在食品微生物检测中有着良好的应用，这项检测技术有着较多的优点，其在测定的过程中，使用的检品比较少，与传统的测定技术相比，其不需要其他试剂，也不需要玻璃器皿，其操作比较简单，而且易于保存、携带方便，使用这项检测技术，不需要花费大量的资金，不会产生大量的废物污染物，可以降低为环境的污染，测试片是一次性使用的，所以也不需要对其进行清洗，减少了工作人员的工作量。测试片可以对多种细菌进行接种，缩短了检测的时间，抑制了细菌的繁殖。应用这种检测技术，无需做大量的准备工作，值得推广。
1 以滤纸为载体的测试片
1.1 菌落总数测试片
采用以滤纸为载体的测试片，需要筛选白色、密度均匀、吸附力强的滤纸，还要将滤纸裁剪为4.0×5.0cm的统一尺寸。检测人员还需要做好灭菌工作，将TTC（氯化三苯四氮唑）加入无菌培养基后，将滤纸浸入其中，要控制好滤纸的培养基吸附量，还要保证测试环境的干燥性，要做好滤纸的密封保存工作，降低装入已灭菌的塑料口袋中。
TTC是一种氧化还原指示剂，其在与氢接触后，会形成非水溶性三苯甲脂，这种物质是红色点状物。在检测的过程中，需要观察滤纸上的红点，这样可以确定细菌的数量。使用TTC时，需要控制用量，如果用量过大，会抑制菌体的生长，不利于对食品中的微生物进行检测。在使用的过程中，要将1mL待测液加在纸片上，然后做压平处理，将其放置在37℃的培养箱中，培养的时间以16-18h为宜，然后对滤纸上的红点进行统计。检测纸片都是一次性的，在测定后直接对其进行焚烧处理。这种检测方法具有操作简单的的优点，单位由于滤纸的间隙比较大，有的菌体会存在于缝隙中，肉眼无法发现，所以，检测值一般小于实际菌的数量。
1.2 大肠菌群测试片
大肠菌群测纸片在我国疾病预防控制中心有着广泛的使用，将其应用在食品微生物检测中，可以提高检测的准确性。在对大肠菌群测试片进行研究后，相关工作人员确定了科学的制作工艺，在与传统检测法的结果进行对比后证明，大肠菌群测试片检测的合格率为95.0%，两种检测法的结果无显著性差异。在应用大肠菌群测试片方法时，还要做好浸液的配置工作。浸液需要用到：乳糖、蛋白胨、胆盐、TTC、琼脂0.1g等，pH在6.8-7.0，灭菌条件为115℃，灭菌时间为15min，浸泡条件60℃，时间为10min，烘干温度55℃。将待测液加到纸片上后，37℃培养16～18h，即可检测出结果。通过检测发现，在纸片上出现的红色斑点，在外周存在一圈黄晕，其属于阳性；如果红色斑点外周存在紫蓝色的晕圈，则属于阴性。红点在接触酸性样品后，纸片会变黄，在培养后无红点出现，则证明为阴性。纸片法在检测时，还需要做好培养液的配置工作，为了保证检测的准确性，要考虑生物酶的作用，还要采用灭菌滤纸吸收培养基中的溶液。细菌在纤维膨胀的作用下，会大量的生长与繁殖，TTC在还原成红色后，会形成红色菌落，其产生黄晕后，细菌会将乳糖分解，并产生酸物质，会使指示剂变黄。在使用TTC或琼脂粉时要控制好用量，过多或过少都会影响检测结果的准确性。
1.3 大肠菌群、大肠杆菌纸片荧光法
该测试片由上海医科大学预防医学研究所研制，利用细菌产生某些代谢酶或代谢产物的特点，建立的一种酶-底物反应法。将待测细菌所需的营养成分、酶促底物以及抑制杂菌的成分固相化在纸片上，通过检测大肠菌群、大肠杆菌产生的有关酶的活性，以达到计数的目的。已有的两种测试片可分别检测大肠菌群和大肠杆菌，均在37℃培养，24h后在波长365nm荧光灯下观察结果。最低检测量可达0～4cfu/ml。该方法的定性、定量结果与AOAC方法无差异。
2 以Petrifilm为载体的测试片
Petrifilm纸片是一种新型的测试片，其得到了AOAC的认可，在食品微生物检测中有着良好的应用，这种纸片使用了凝胶剂，可以对菌落进行准确的计数，是一种可再生的水合物干膜，薄膜的下层还覆盖了培养基，其含有供微生物生长的营养剂，当外界环境的温度达到要求，则可对细菌微生物进行培养。
2.1 菌落总数测试片
揭起覆盖的胶片，将1ml样品悬液滴于纸片中央后盖回，用压板轻轻压下，将样品均匀地覆盖于培养基上。静置约1min使培养基中的凝胶固化。测试片水平放于37℃恒温箱内培养。细菌总数测试片培养48±3h后计数红色菌落数作为细菌总数，亦可用作乳酸菌测定。
2.2 霉菌、酵母菌测试片
该测试片含霉菌酵母生长的营养物质、菌落生长的指示剂，并添加抗生素以抑制细菌生长。接种后，21℃～25℃培养3～5d，计数。酵母菌菌落特征：小型菌落，边缘清晰，颜色均一，灰白色至蓝绿色，菌落隆起。霉菌菌落特征：大型菌落，边缘模糊，中间颜色深暗，颜色不均一，菌落扁平。
2.3 大肠菌群、大肠杆菌检测纸片
该测试片含有改良的VRB（VioletRedBile）培养基及葡萄糖苷酸酶指示剂。绝大多数大肠杆菌能产生β-葡萄糖苷酸酶，与培养基中的指示剂反应，产生蓝色沉淀环绕在大肠杆菌菌落周围，表面覆盖的胶膜，可留住发酵乳糖产生的气体，形成蓝色和深蓝色的菌落并有气泡相连。大肠菌群菌落在测试片上产酸，pH指示剂使培养基变为暗红色，在红色菌落周围有气泡者为大肠菌群。所以，一次测试即可测出大肠杆菌和大肠菌群数：带气泡的蓝色和红色菌落为大肠菌群，带气泡的蓝色菌落为大肠杆菌。
2.4 金黄色葡萄球菌测试片
该测试片含有改良的BairdParker培养基，对于金黄色葡萄球菌的生长有很强的选择性，并能将其鉴定出来，与3个BairdParker平板加一个血浆凝固酶试管的方法等效。其可形成暗紫色菌落，如果在测试片上有其它可疑菌落出现，可以使用金黄色葡萄球菌确认反应片。其含有显色剂及脱氧核糖核酸，由于金黄色葡萄球菌产生的脱氧核糖核酸酶，具有耐高温特性，高温处理后仍能将DNA降解而与反应片上的显色剂反应形成粉红色环。
3 讨论
快速测试片在食品微生物检测中有着广泛的应用，经过实践证明，使用快速测试片可以提高检测的质量以及效率，其不会产生二次污染，而且操作较为简单，这种新型的检测方法也有一定缺点，比较容易受到外界因素的影响，检测人员必须具有专业的技术，要保证检测的条件符合要求，还要控制试剂的用量，要保证滤纸的质量，如果滤孔过大，很容易隐藏细菌。应用快速测试片，可以有效的食品安全检测的效果，这种方法简单、快捷，有着良好的发展前景，在应用的过程中，要不断的积累经验，还要对检测技术进行改进，从而保证食品食用的安全性。
参考文献
[1]范远景，潘丙南，陈伟，韩明忠，程仁剑，李艳.3M纸片检测大肠菌群法与国标快速检测法的比较研究[J].安徽农业科学，2009（1）.
[2]范萍，王婷，梁炎.快速检验纸片在食品微生物检测中的应用[J].中国医药指南，2008（19）.
[3]叶思霞，蔡美平，罗燕娜.食品微生物检测技术研究进展[J].安徽农学通报（上半月刊），2009（19）.
[4]吴毓薇，吴许文，吴清平，黄汝添.食品卫生微生物测试片检测技术进展[J].中国卫生检验杂志，2008（12）.
[5]陈忠杰，宁豫昌，高领.食品微生物检测技术研究进展[J].郑州牧业工程高等专科学校学报，2007（2）.
关键词：快速测试片；食品；微生物；检测；应用
快速测试片在食品微生物检测中有着良好的应用，这项检测技术有着较多的优点，其在测定的过程中，使用的检品比较少，与传统的测定技术相比，其不需要其他试剂，也不需要玻璃器皿，其操作比较简单，而且易于保存、携带方便，使用这项检测技术，不需要花费大量的资金，不会产生大量的废物污染物，可以降低为环境的污染，测试片是一次性使用的，所以也不需要对其进行清洗，减少了工作人员的工作量。测试片可以对多种细菌进行接种，缩短了检测的时间，抑制了细菌的繁殖。应用这种检测技术，无需做大量的准备工作，值得推广。
1 以滤纸为载体的测试片
1.1 菌落总数测试片
采用以滤纸为载体的测试片，需要筛选白色、密度均匀、吸附力强的滤纸，还要将滤纸裁剪为4.0×5.0cm的统一尺寸。检测人员还需要做好灭菌工作，将TTC（氯化三苯四氮唑）加入无菌培养基后，将滤纸浸入其中，要控制好滤纸的培养基吸附量，还要保证测试环境的干燥性，要做好滤纸的密封保存工作，降低装入已灭菌的塑料口袋中。
TTC是一种氧化还原指示剂，其在与氢接触后，会形成非水溶性三苯甲脂，这种物质是红色点状物。在检测的过程中，需要观察滤纸上的红点，这样可以确定细菌的数量。使用TTC时，需要控制用量，如果用量过大，会抑制菌体的生长，不利于对食品中的微生物进行检测。在使用的过程中，要将1mL待测液加在纸片上，然后做压平处理，将其放置在37℃的培养箱中，培养的时间以16-18h为宜，然后对滤纸上的红点进行统计。检测纸片都是一次性的，在测定后直接对其进行焚烧处理。这种检测方法具有操作简单的的优点，单位由于滤纸的间隙比较大，有的菌体会存在于缝隙中，肉眼无法发现，所以，检测值一般小于实际菌的数量。
1.2 大肠菌群测试片
大肠菌群测纸片在我国疾病预防控制中心有着广泛的使用，将其应用在食品微生物检测中，可以提高检测的准确性。在对大肠菌群测试片进行研究后，相关工作人员确定了科学的制作工艺，在与传统检测法的结果进行对比后证明，大肠菌群测试片检测的合格率为95.0%，两种检测法的结果无显著性差异。在应用大肠菌群测试片方法时，还要做好浸液的配置工作。浸液需要用到：乳糖、蛋白胨、胆盐、TTC、琼脂0.1g等，pH在6.8-7.0，灭菌条件为115℃，灭菌时间为15min，浸泡条件60℃，时间为10min，烘干温度55℃。将待测液加到纸片上后，37℃培养16～18h，即可检测出结果。通过检测发现，在纸片上出现的红色斑点，在外周存在一圈黄晕，其属于阳性；如果红色斑点外周存在紫蓝色的晕圈，则属于阴性。红点在接触酸性样品后，纸片会变黄，在培养后无红点出现，则证明为阴性。纸片法在检测时，还需要做好培养液的配置工作，为了保证检测的准确性，要考虑生物酶的作用，还要采用灭菌滤纸吸收培养基中的溶液。细菌在纤维膨胀的作用下，会大量的生长与繁殖，TTC在还原成红色后，会形成红色菌落，其产生黄晕后，细菌会将乳糖分解，并产生酸物质，会使指示剂变黄。在使用TTC或琼脂粉时要控制好用量，过多或过少都会影响检测结果的准确性。
1.3 大肠菌群、大肠杆菌纸片荧光法
该测试片由上海医科大学预防医学研究所研制，利用细菌产生某些代谢酶或代谢产物的特点，建立的一种酶-底物反应法。将待测细菌所需的营养成分、酶促底物以及抑制杂菌的成分固相化在纸片上，通过检测大肠菌群、大肠杆菌产生的有关酶的活性，以达到计数的目的。已有的两种测试片可分别检测大肠菌群和大肠杆菌，均在37℃培养，24h后在波长365nm荧光灯下观察结果。最低检测量可达0～4cfu/ml。该方法的定性、定量结果与AOAC方法无差异。
2 以Petrifilm为载体的测试片
Petrifilm纸片是一种新型的测试片，其得到了AOAC的认可，在食品微生物检测中有着良好的应用，这种纸片使用了凝胶剂，可以对菌落进行准确的计数，是一种可再生的水合物干膜，薄膜的下层还覆盖了培养基，其含有供微生物生长的营养剂，当外界环境的温度达到要求，则可对细菌微生物进行培养。
2.1 菌落总数测试片
揭起覆盖的胶片，将1ml样品悬液滴于纸片中央后盖回，用压板轻轻压下，将样品均匀地覆盖于培养基上。静置约1min使培养基中的凝胶固化。测试片水平放于37℃恒温箱内培养。细菌总数测试片培养48±3h后计数红色菌落数作为细菌总数，亦可用作乳酸菌测定。
2.2 霉菌、酵母菌测试片
该测试片含霉菌酵母生长的营养物质、菌落生长的指示剂，并添加抗生素以抑制细菌生长。接种后，21℃～25℃培养3～5d，计数。酵母菌菌落特征：小型菌落，边缘清晰，颜色均一，灰白色至蓝绿色，菌落隆起。霉菌菌落特征：大型菌落，边缘模糊，中间颜色深暗，颜色不均一，菌落扁平。
2.3 大肠菌群、大肠杆菌检测纸片
该测试片含有改良的VRB（VioletRedBile）培养基及葡萄糖苷酸酶指示剂。绝大多数大肠杆菌能产生β-葡萄糖苷酸酶，与培养基中的指示剂反应，产生蓝色沉淀环绕在大肠杆菌菌落周围，表面覆盖的胶膜，可留住发酵乳糖产生的气体，形成蓝色和深蓝色的菌落并有气泡相连。大肠菌群菌落在测试片上产酸，pH指示剂使培养基变为暗红色，在红色菌落周围有气泡者为大肠菌群。所以，一次测试即可测出大肠杆菌和大肠菌群数：带气泡的蓝色和红色菌落为大肠菌群，带气泡的蓝色菌落为大肠杆菌。
2.4 金黄色葡萄球菌测试片
该测试片含有改良的BairdParker培养基，对于金黄色葡萄球菌的生长有很强的选择性，并能将其鉴定出来，与3个BairdParker平板加一个血浆凝固酶试管的方法等效。其可形成暗紫色菌落，如果在测试片上有其它可疑菌落出现，可以使用金黄色葡萄球菌确认反应片。其含有显色剂及脱氧核糖核酸，由于金黄色葡萄球菌产生的脱氧核糖核酸酶，具有耐高温特性，高温处理后仍能将DNA降解而与反应片上的显色剂反应形成粉红色环。
3 讨论
快速测试片在食品微生物检测中有着广泛的应用，经过实践证明，使用快速测试片可以提高检测的质量以及效率，其不会产生二次污染，而且操作较为简单，这种新型的检测方法也有一定缺点，比较容易受到外界因素的影响，检测人员必须具有专业的技术，要保证检测的条件符合要求，还要控制试剂的用量，要保证滤纸的质量，如果滤孔过大，很容易隐藏细菌。应用快速测试片，可以有效的食品安全检测的效果，这种方法简单、快捷，有着良好的发展前景，在应用的过程中，要不断的积累经验，还要对检测技术进行改进，从而保证食品食用的安全性。
参考文献
[1]范远景，潘丙南，陈伟，韩明忠，程仁剑，李艳.3M纸片检测大肠菌群法与国标快速检测法的比较研究[J].安徽农业科学，2009（1）.
[2]范萍，王婷，梁炎.快速检验纸片在食品微生物检测中的应用[J].中国医药指南，2008（19）.
[3]叶思霞，蔡美平，罗燕娜.食品微生物检测技术研究进展[J].安徽农学通报（上半月刊），2009（19）.
[4]吴毓薇，吴许文，吴清平，黄汝添.食品卫生微生物测试片检测技术进展[J].中国卫生检验杂志，2008（12）.
[5]陈忠杰，宁豫昌，高领.食品微生物检测技术研究进展[J].郑州牧业工程高等专科学校学报，2007（2）.