【摘 要】
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目的探索微小RNA(miRNA，miR)-345-5p对成骨细胞的调控机制。方法利用miRNA芯片寻找差异表达miRNA。pLVX-IRES-ZsGreen1质粒构建miR-345-5p过表达载体，建立过表达miR-345-5p大鼠成骨细胞、过表达变异miR-345-5p大鼠成骨细胞和空白对照组。通过细胞计数试剂盒(CCK-8)及生长曲线实验对比3组细胞增殖能力，双荧光素酶报告基因实验验证miR-345-5p与Smad1基因相互作用。构建miR-345-5p 空质粒、对照RNA 空质粒、对照RNA Sma
【机 构】
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目的探索微小RNA(miRNA，miR)-345-5p对成骨细胞的调控机制。
方法利用miRNA芯片寻找差异表达miRNA。pLVX-IRES-ZsGreen1质粒构建miR-345-5p过表达载体，建立过表达miR-345-5p大鼠成骨细胞、过表达变异miR-345-5p大鼠成骨细胞和空白对照组。通过细胞计数试剂盒(CCK-8)及生长曲线实验对比3组细胞增殖能力，双荧光素酶报告基因实验验证miR-345-5p与Smad1基因相互作用。构建miR-345-5p 空质粒、对照RNA 空质粒、对照RNA Smad1质粒和miR-345-5p Smad1质粒组，在大鼠成骨细胞内验证miR-345-5p与Smad1基因的相互作用。采用Student-t检验和ANOVA分析。
结果生信分析提示miR-345-5p在骨折中的高表达，Smad1为其调控分子。将miR-345-5p质粒导入大鼠成骨细胞，CCK-8提示miR-345-5p质粒较miR-345-5p变异体质粒(48 h：q＝7.453，P
其他文献
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目的检测长链非编码RNAH19(lncRNAH19)对甲状腺癌细胞凋亡的影响并探讨其机制。方法体外培养人甲状腺癌FTC133细胞，对其处理并分为lncRNAH19小干扰RNA(siRNA)组和阴性对照组，应用流式细胞术检测细胞凋亡水平；应用实时定量聚合酶链反应(Real-timePCR)及蛋白质印迹法(Westernblot)检测凋亡相关分子B细胞淋巴瘤-2(bcl-2)、bcl-2相关X蛋白(bax)及半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3(Caspase-3)的mRNA及蛋白表达水平；应用Westernbl
目的探讨七叶皂苷钠(SA)对脂多糖(LPS)诱导的血管内皮损伤致炎症作用及机制。方法IMDM培养基(含10%胎牛血清)体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC)，用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测0.4、1.6和6.4μg/ml的SA对HUVEC的毒性，采用2.5μg/ml和作用时间为6h的LPS构建炎症损伤细胞模型。实验分组为空白组、模型组(2.5μg/mlLPS)、低剂量组(2.5μg/mlLPS 0.4μg/mlSA)、中剂量组(2.5μg/mlLPS 1.6μg/mlSA)和高剂量组(2.5μg/ml
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目的探索一种简便的动态检测胰腺腺泡细胞内钙离子浓度的方法。方法无菌采集大鼠胰腺，去除脂肪和淋巴组织，37℃预热的胶原酶消化胰腺组织，分离大鼠胰腺腺泡细胞。加入钙离子荧光探针Fluo-3/AM负载腺泡细胞，流式细胞仪动态监测腺泡细胞内钙离子浓度变化。结果对照组腺泡细胞处于静息状态，钙离子荧光强度稳定，8只大鼠胰腺腺泡细胞内钙离子浓度随时间变化趋势一致，平均荧光强度值为307.75±36.45(n＝8)；刺激组加入牛磺胆酸钠后腺泡细胞钙离子荧光强度升高，第27.76秒达峰值，检测结果稳定。结论流式细胞仪为腺泡
目的探讨长链非编码RNA核富集转录体1(LncNEAT1)胰腺癌中的表达水平及其影响胰腺癌细胞侵袭和迁移能力的影响，分析胰腺癌转移与LncNEAT1、微小RNA-15b(miR-15b)之间的相关性，探讨LncNEAT1影响胰腺癌细胞生物学表型的机制。方法实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测40例胰腺癌组织及胰腺癌细胞中LncNEAT1、微小RNA-15b(miR-15b)的表达水平，小干扰RNA转染至胰腺癌细胞SW1990中，Transwell实验检测转染后胰腺癌细胞的迁移和侵袭能力；过表达N
目的探究微小RNA-144(miR-144)在对2型糖尿病骨髓间充质干细胞(BMSCs)成骨能力的影响。方法构建2型糖尿病大鼠模型，并从中提取出BMSCs，在高糖骨诱导培养基下，将细胞分组为miR-144-mimic、mimic-NC、miR-144-inhibitor以及inhibitor-NC组，分别通过蛋白印迹法(Westernblot)及荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测各组细胞中成骨相关基因Runt相关基因2(Runx2)、OCN、碱性磷酸酶(ALP)以及通路蛋白Smad1的蛋白及mRNA水平，
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