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刚地弓形虫GJS株微线体蛋白3基因真核表达质粒的构建及在BHK-21细胞中的表达

来源 :中国兽医科学 | 被引量 : 0次 | 上传用户：lst39889667

【摘 要】

：

采用PCR技术从刚地弓形虫GJS株基因组DNA中扩增微线体蛋白3（MIC3）基因，并克隆到pMD18-T载体，经PCR、酶切及测序鉴定后，阳性重组质粒酶切并亚克隆到真核表达载体pcDNA3．1（＋）后进行PCR、

【作 者】

：

张燕丽 曹丽艳 芦赟 苟惠天 王艳华 付宝权 李文卉 张德林 

【机 构】

：

甘肃农业大学动物医学院,中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部兽医公共卫生重点开放实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室

【出 处】

：

中国兽医科学

【发表日期】

：

2009年2期

【关键词】

：

刚地弓形虫 微线体蛋白3 基因克隆 真核表达 Toxoplasma gondii   microneme protein 3   gene cloning  

【基金项目】

：

基金项目：国家“十一五”科技支撑计划项目（2007BAD40805）,公益性行业（农业）科研专项（200803017）,甘肃省重大专项科技项目（2GS063-A43-013）

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采用PCR技术从刚地弓形虫GJS株基因组DNA中扩增微线体蛋白3（MIC3）基因，并克隆到pMD18-T载体，经PCR、酶切及测序鉴定后，阳性重组质粒酶切并亚克隆到真核表达载体pcDNA3．1（＋）后进行PCR、酶切及测序鉴定。将重组质粒转染BHK-21细胞。间接免疫荧光染色证明，质粒DNA成功转染到细胞中并得以表达。Western-blot分析证实，细胞裂解液及上清样品中有1条约39．2ku的条带，可被山羊抗刚地弓形虫超免疫血清所识别，大小与预测值相符。表明，真核表达质粒pcDNA3-MIC3中的MIC

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