探讨尿刊酸修饰壳聚糖(UAC)负载siRNA对中性粒细胞明胶酶相关载脂蛋白(NGAL)的基因沉默作用及对结肠癌细胞增殖、迁移和凋亡的影响。
方法采用UAC和壳聚糖(CTS)分别包裹NGAL siRNA转染结肠癌细胞株HT-29,采用实时荧光定量PCR检测NGAL的表达量,并分析NGAL基因沉默与细胞增殖、迁移及凋亡的关系。
结果荧光显微镜下显示,UAC-siRNA的转染效率为(37.52 ± 7.17)%,高于CTS-siRNA的(11.32 ± 3.39)%,差异有统计学意义(t= 6.102,P= 0.005)。siRNA转染48 h后,以GAPDH为内参,测得UAC组NGAL基因的相对表达量为0.350,CTS组NGAL基因的相对表达量为0.529,差异有统计学意义(t=-3.743,P= 0.02)。增殖实验显示,UAC和CTS两组与对照组相比,细胞增殖率稍有下降,但差异无统计学意义(F=9.520,P= 0.438)。而迁移实验显示,UAC组和CTS组HT29细胞的24 h迁移率均低于对照组(F= 6.756,P= 0.029);其中UAC组HT29细胞的24 h迁移率为(77.90 ± 7.14)%,低于CTS组的(87.67 ± 3.98)%(t=-1.704,P= 0.164)。凋亡检测显示,转染后2 d,UAC组细胞凋亡率为(15.800 ± 1.054)%,高于CTS组的(12.900 ± 0.656)%和对照组的(11.933 ± 1.914)%,差异有统计学意义(F= 7.004,P= 0.027)。
结论CTS经尿刊酸修饰为UAC后,包裹能力及转染效率显著增加;以UAC为载体的siRNA干扰NGAL基因后,可沉默HT29结肠癌细胞株NGAL基因的表达,抑制HT29结肠癌细胞迁移,促进细胞凋亡。