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目的 利用实验设计(design of experiment,DOE)建立抗程序性死亡因子1(programmed cell death 1,PD-1)及其配体(programmed cell death-ligand 1,PD-L1)单抗基于报告基因的抗体依赖细胞介导的细胞毒效应(antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity,ADCC)生物学活性优化及验证方法.方法 利用Jurkat-hFcγRⅢa-NFAT转基因细胞系作为效应细胞,分别以293FT-PD-1细胞系和CHO-PD-L1细胞系作为靶细胞,通过荧光素酶检测系统(BrightGloTM Luciferase Assay system)建立抗PD-1/PD-L1单抗的ADCC生物学活性检测方法,并运用DOE方法进行试验优化和方法学验证.结果 抗PD-1/PD-L1单抗在该方法中存在量效关系,且符合四参数方程:y=(A-D)/[1+(x/C)B] +D,方法经优化后确定抗体量效范围分别为10000～4.833 ng·mL-1和2000～0.488 ng·mL-1,效靶比(effect target ratio,E∶T)为分别为6∶1和3∶1,诱导时间均为20 h.该方法具有良好的专属性;抗PD-1单抗4个不同稀释组回收率样本经3次检测,相对效价分别为(51.74±2.22)％、(77.12±3.14)％、(118.71±2.83)％和(156.20±12.99)％;对应的回收率分别为(103.49±4.44)％、(102.83±4.19)％、(94.96±2.26)％和(104.14±8.66)％,抗PD-L1单抗4个不同稀释组回收率样本经3次检测,相对效价分别为(54.32±4.75)％、(75.24±4.25)％、(127.40±2.43)％和(156.82±3.27)％;对应的回收率分别为(108.64±9.51)％、(100.33±5.67)％、(101.92±1.94)％和(104.55±2.18)％,上述结果的RSD均小于10％.结论 本实验利用DOE设计成功建立基于报告基因的抗PD-1/PD-L1单抗ADCC生物学活性的优化及验证方法,该方法专属性强、重复性好,准确性高,可作为抗PD-1/PD-L1单抗ADCC生物学活性的评价方法.