目的 亲环素A是免疫抑制剂环孢菌素A的胞内受体,与多种重要生理和病理过程密切相关,已经成为如免疫抑制、病毒感染和炎症等多类疾病的重要研发靶点。为了筛选新型小分子CypA抑制剂药物,本研究建立了一个基于荧光偏振方法的CypA抑制剂药物高通量筛选模型。方法 应用PCR方法从人外周血淋巴细胞中扩增cyp A基因,通过大肠埃希菌系统重组表达CypA蛋白,并利用镍离子螯合亲和层析柱进行蛋白纯化,以FITC标记CsA为示踪剂建立CypA抑制剂的筛选方法。结果 SDSPAGE检测重组表达的CypA蛋白纯度大于95%。经过荧光偏振测定体系中示踪剂FITC标记CsA和重组CypA浓度的优化,确定了最佳的荧光偏振反应条件,使其信号本底比大于2.0,Z’因子为0.71。阳性药Cs A能剂量依赖地与荧光标记的CsA竞争结合于CypA,其IC50值为221.3nmol/L。利用建立的筛选模型,对28215个微生物次生代谢产物粗提物进行了初筛和复筛,从中筛选得到43个抑制率大于80%的样品。经液相-质谱方法进一步分析,其中17个真菌的发酵产物中含有环孢菌素类似物。结论 本研究采用荧光偏振方法定量测定微生物代谢产物与荧光标记探针竞争结合CypA,可以简单、快捷地进行CypA抑制剂药物或环孢菌素产生菌的高通量筛选,为后期的药物研发奠定基础。