【摘 要】
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背景:目前多项研究证实了miRNA影响增生性瘢痕的发生发展,STAT1参与瘢痕成纤维细胞的增殖过程,猜测miR-382-3p也有可能与增生性瘢痕的发生发展有关系。目的:探讨miR-382-3p对人增生性瘢痕成纤维细胞增殖的作用机制。方法:收集宁夏医科大学总医院烧伤整形外科提供的增生性瘢痕和同一个体正常皮肤,提取人增生性瘢痕成纤维细胞和人正常皮肤成纤维细胞;细胞转染分别设置:(1)对照组(不做处理)
【基金项目】
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国家自然科学基金(81860555),项目负责人:沈江涌; 宁夏高等学校一流学科建设(宁夏医科大学国内一流建设学科临床医学)资助项目(NXYLXK2017A05),项目负责人:沈江涌~~;
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背景:目前多项研究证实了miRNA影响增生性瘢痕的发生发展,STAT1参与瘢痕成纤维细胞的增殖过程,猜测miR-382-3p也有可能与增生性瘢痕的发生发展有关系。目的:探讨miR-382-3p对人增生性瘢痕成纤维细胞增殖的作用机制。方法:收集宁夏医科大学总医院烧伤整形外科提供的增生性瘢痕和同一个体正常皮肤,提取人增生性瘢痕成纤维细胞和人正常皮肤成纤维细胞;细胞转染分别设置:(1)对照组(不做处理)、miR-382-3p阴性对照组、miR-382-3p过表达组;(2)对照组(不做处理)、STAT1干扰对照组(si-NC)和STAT1干扰组(si-STAT1-1、si-STAT1-2、si-STAT1-3)。苏木精-伊红染色鉴定正常皮肤和增生性瘢痕;免疫荧光鉴定成纤维细胞;qRT-PCR检测miR-382-3p、STAT1、增殖细胞核抗原及细胞周期依赖性激酶抑制物(p27)mRNA表达;Western blot检测STAT1、增殖细胞核抗原及p27蛋白表达;CCK8、Ed U检测细胞增殖活力和增殖水平;Targetscan预测miR-382-3p的下游靶基因,双荧光素酶验证miR-382-3p与STAT1的结合情况。结果与结论:(1)与正常皮肤和正常皮肤成纤维细胞相比,miR-382-3p在增生性瘢痕和增生性瘢痕成纤维细胞中呈低表达(组织:P <0.01,细胞:P <0.01),STAT1在增生性瘢痕和增生性瘢痕成纤维细胞中呈高表达(组织水平mRNA:P <0.01,组织水平蛋白:P <0.01;细胞水平mRNA:P <0.01,细胞水平蛋白:P <0.01);(2)过表达miR-382-3p后细胞增殖能力减弱(P <0.05),Ed U阳性细胞数减少(P <0.01),增殖细胞核抗原的表达减少(mRNA:P <0.01,蛋白:P <0.05),p27的表达增加(mRNA:P <0.05,蛋白:P <0.05);(3)miR-382-3p能够靶向调控STAT1的表达(P <0.01),过表达miR-382-3p可导致STAT1的表达减少(mRNA:P <0.01,蛋白:P <0.01);(4)干扰STAT1后可导致增殖细胞核抗原的表达减少(P <0.05),p27的表达增加(P <0.05),Ed U阳性细胞数减少(P <0.01);(5)结果表明:miR-382-3p可通过抑制STAT1的表达进而抑制增生性瘢痕成纤维细胞的增殖,为未来增生性瘢痕的治疗寻找有效靶点提供一定的理论依据。
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