用高效液相色谱法(HPLC)测定脑干中5-羟色氨酸浓度及色氨酸羟化酶活性

来源 :国外医学.临床生物化学与检验学分册 | 被引量 : 0次 | 上传用户:yymmttjjjj
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色氨酸羟化酶(TRP-OH-ASE)按下述机制将色氨酸(TRP)转化为5-羟色氨酸(5-OH-TRP)。式中BH_4:四氢生物蝶啶,BH_2:二氢生物蝶啶;DHPR:二氢蝶啶还原酶。此乃合成5-羟色胺(SER)的第一步。为测定这种脑酶形成的微量5-羟色氨酸及其酶活性,必须有一种灵敏而特异的方法。作者将HPLC结合自然荧光检测的测定法,使检测限度低到10 fmol(10~(15)mol)5-OH-TRP/100μl样品,可测酶活性为0.1μg 5-OH-TRP/小时/克脑组织。将待测液脱去蛋白质后,可直接上柱进行HPLC,用天然荧光测定5-OH-TRP时,不受过量色氨酸及 Tryptophan hydroxylase (TRP-OH-ASE) The tryptophan (TRP) is converted to 5-hydroxytryptophan (5-OH-TRP) according to the following scheme. Where BH_4: tetrahydrobiopterin, BH_2: dihydrobiopterin; DHPR: dihydropteridine reductase. This is the first step in the synthesis of serotonin (SER). In order to determine the trace amounts of 5-hydroxytryptophan and its enzymatic activity formed by this brain enzyme, there must be a sensitive and specific method. In this study, we determined the enzymatic activity of 5-OH-TRP / 100μl enzyme with the detection limit of 10 fmol (10-15mol) 5-OH-TRP / Brain tissue. After removing the protein from the solution to be tested, HPLC can be carried out directly on the column. When using natural fluorescence to measure 5-OH-TRP, it is free from excess tryptophan and
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