【摘 要】
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目的观察Notch1信号在脂多糖(LPS)诱导巨噬细胞炎症介质表达中的作用并探讨其作用机制。方法给予100 ng/m L LPS处理小鼠RAW264.7细胞8 h,反转录PCR观察RAW264.7细胞Notch1和
【基金项目】
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国家自然科学基金(81560004);吉林省科技厅项目(20160101210JC);吉林省卫生计生委青年项目(2015Q028)
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目的观察Notch1信号在脂多糖(LPS)诱导巨噬细胞炎症介质表达中的作用并探讨其作用机制。方法给予100 ng/m L LPS处理小鼠RAW264.7细胞8 h,反转录PCR观察RAW264.7细胞Notch1和发状分裂相关增强子1(Hes1)mRNA表达;LPS处理前给予Notch1信号抑制剂10μmol/L(3,5-二氟苯乙酰基)-L-丙氨酰基-L-2-苯基甘氨酸叔丁酯(DAPT)预处理1 h,ELISA检测细胞培养液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6、一氧化氮(NO)和前列腺素E2(PGE2)含量,反转录PCR检测诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和环加氧酶2(COX-2)mRNA水平,Western blot法检测iNOS、COX-2、核因子κBp65(NF-κBp65)、磷酸化的核因子κB抑制蛋白α(p-IκBα)蛋白水平。结果 LPS刺激RAW264.7细胞后明显提高细胞Notch1和Hes1 mRNA水平,DAPT明显抑制LPS诱导RAW264.7细胞TNF-α、IL-1β、IL-6、NO和PGE2的表达。DAPT阻断Notch1信号后明显降低LPS诱导RAW264.7细胞的iNOS和COX-2 mRNA和蛋白水平,DAPT能够抑制LPS诱导的IκBα磷酸化和NF-κBp65核转位。结论 Notch1通过激活NF-κB参与LPS诱导巨噬细胞炎症介质释放。
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