【摘 要】
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通过研究重组apo(a)KringleⅣ-10(KⅣ-10)的赖氨酸结合能力对纤溶酶原与内皮细胞结合的影响,探讨apo(a)在抑制纤溶过程中的作用,为脂蛋白(a)[lipoprotein(a),Lp(a)]致动脉粥
【机 构】
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武汉大学医学院生物化学教研室,武汉,430071
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通过研究重组apo(a)KringleⅣ-10(KⅣ-10)的赖氨酸结合能力对纤溶酶原与内皮细胞结合的影响,探讨apo(a)在抑制纤溶过程中的作用,为脂蛋白(a)[lipoprotein(a),Lp(a)]致动脉粥样硬化机理研究提供依据.将含apo(a)野生型KⅣ-10((wild-type KⅣ-10/Trp72,wt-KⅣ-10/Trp72)和突变型KⅣ-10(mutate-type KⅣ-10/Trp2,mut-KⅣ-10/Arg2)基因片段重组质粒,分别转化至E.coli DH5α菌株中并表达含这2个重组片段的融合蛋白,通过Glutathione-Agarose beads亲和层析柱进行分离和提纯,经L-Lys-Sepharose 4B亲和层析柱检测其赖氨酸结合能力.再以异硫氰酸荧光素标记的纤溶酶原为配基,观察这2种基因表达片段对纤溶酶原与人脐静脉内皮细胞(human umbilicalvein endothe-lial cells,HUVEC)结合的影响.结果显示:在E.coli DH 5α菌株中表达的野生型谷胱甘肽S-转移酶(glutathione S-transferase,GST)-KⅣ-10/Trp72(GST-wt-KⅣ-10/Trp72)融合蛋白和突变型谷胱甘肽S-转移酶(GST-mut-KⅣ-10/Arg2)融合蛋白在赖氨酸结合能力上存在明显差异.其中GST-wt-KⅣ-10/Trp72能有效地抑制纤溶酶原与人脐静脉内皮细胞的结合;而GST-mut-KⅣ-10/Arg72在任一浓度范围内均无这种抑制作用.结果提示,apo(a)KⅣ-10对纤溶的抑制作用与其赖氨酸结合能力密切相关;而KⅣ-10的赖氨酸的结合能力与其赖氨酸结合位点中的Trp72有关.
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