【摘 要】
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目的 观察DNA甲基转移酶1(DNMT1)和DNA甲基转移酶3b(DNMT3b)基因干扰对胰腺癌BxPC-3细胞增殖和凋亡的影响.方法 利用LipofectamineTM 2000转染DNMT1和DNMT3b小分子干扰RNA (s
【机 构】
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南昌大学第一附属医院普外科,南昌大学第二附属医院分子医学研究中心
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目的 观察DNA甲基转移酶1(DNMT1)和DNA甲基转移酶3b(DNMT3b)基因干扰对胰腺癌BxPC-3细胞增殖和凋亡的影响.方法 利用LipofectamineTM 2000转染DNMT1和DNMT3b小分子干扰RNA (siRNA)至胰腺癌BxPC-3细胞.实验共分5组:DNMT1干扰组(转染DNMT1-siRNA)、DNMT3b干扰组(转染DNMT3b-siRNA)、双重干扰组(转染DNMT1+ DNMT3b-siRNA)、阴性对照组(转染negative-siRNA)和空白对照组(转染脂质体).转染48 h后,应用荧光定量聚合酶链反应(PCR)法和Western blot法分别检测细胞中DNMT1、DNMT3b mRNA和蛋白的表达水平；噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞体外增殖活力；流式细胞仪检测细胞凋亡.结果 与空白对照组和阴性对照组比较,各干扰组的DNMT1和(或)DNMT3b mRNA及蛋白表达量均显著降低(P＜0.01).DNMTI干扰组和双重干扰组的细胞生长抑制率分别为30.9％和28.3％,均显著高于DNMT3b干扰组的14.5％ (P＜0.01),而DNMT1干扰组和双重干扰组之间差异无统计学意义(P＞0.05).空白对照组、阴性对照组、DNMT1干扰组、DNMT3b干扰组和双重干扰组的细胞凋亡率分别为3.74％、5.07％、44.46％、24.20％和39.24％,各干扰组的细胞凋亡率均比对照组显著增加(P＜0.01),DNMT1干扰组与双重干扰组的细胞凋亡率均显著高于DNMT3b干扰组(P＜0.01),而DNMT1干扰组与双重干扰组之间差异无统计学意义(P＞0.05).结论 DNMT1和(或)DNMT3b基因表达下调后,能抑制胰腺癌BxPC-3细胞生长,并能诱导细胞凋亡.DNMT1单干扰的抑癌作用优于DNMT3b单干扰,DNMT1和DNMT3b双重干扰无明显的协同效应.
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